1. 得到的污水或水中含有大肠杆菌的样本。
2. 稀释的示例 1:10 和 1: 100 用三缓冲区。执行此操作通过将 1.0 毫升的培养液转移到 9 毫升的三缓冲区，然后使第二 10 倍稀释。
3. 通过将它们放在蒸汽浴室或高压釜融化三管的软琼脂 （0.7%营养琼脂或胨大豆琼脂每 3 毫升管）。
4. 将琼脂放在水浴在 45-48 ° C 为 15 分钟，使温度的琼脂调整到 45 ° c。
5. 第一筒，添加 1 毫升的大肠杆菌¹和 1 毫升的稀释样品的日志阶段培养液。
6. 删除管水浴和轻轻地岩手混合悬浮 2 3 s 之间。
7. 水从管子用一张纸巾擦干和琼脂倒入事先准备好的培养皿，含底部琼脂 （普通营养琼脂或胨大豆琼脂）。
8. 快速旋转板传播顶级琼脂。因此，请务必琼脂覆盖整个表面。
9. 重复步骤 5-8 与其他两个管的软琼脂，使用 1 毫升的细菌和 1 毫升的每个样品稀释 (图 2)。
10. 琼脂凝固后，倒置培养皿和孵化在 37 ° C，为 48 h.敲开了盖子的培养皿任何水分。如果水分就会造成这种病毒在琼脂表面蔓延斑块上落下。
11. 经过孵化，数数每个稀释 (图 3) 上的斑块数目和计算噬菌体在原样品的浓度。记录的大小或外观斑块的任何重大差异。

图 2。使用顶级琼脂大肠杆菌计数细菌草坪的编制程序。

图 3。噬菌体在细菌的草坪上的斑块。

¹大肠杆菌株 ATCC 15597 通常会产生斑块从污水样本的最大数量。它应该长成隔夜中含有的营养或胨大豆肉汤 100 毫升 250 毫升锥形瓶及孵化下晃动条件在 35 ° c。前噬菌体检测 3 h 接种一毫升的这种文化到新鲜的烧瓶含有 100 毫升的营养或胨大豆肉汤和地方在晃动的水浴在 35-37 ° c。这将确保细菌处于日志阶段的增长。