Injection of Glioblastoma (GBM) Cells into E5 Optic Tectum In Ovo

首先，将受精鸡蛋在加湿的鸡蛋孵化器中孵化，尖头朝下，温度为 37.5 摄氏度。在孵育的第六天或E5，通过喷洒70%乙醇对蛋壳进行消毒。使用鸡蛋烛台，用铅笔沿着胚胎上方的空域周边描摹，并用透明胶带覆盖轮廓区域。

用弯曲的剪刀在描边区域周围轻轻切割，不要切入胚胎膜或血管。丢弃蛋壳的顶部。在气空间膜上加入几滴盐水或细胞培养基以使其润湿，使其易于分离。

使用细镊子，小心地刺穿胚胎顶部的气空间膜。删除它。抓住立即围绕胚胎的透明羊膜以定位头部，并使用玻璃微量移液器和气动PicoPump将约50， 000个细胞注射到5微升合适的细胞培养基中。

在胚胎顶部加入几滴每毫升50毫克的氨苄青霉素，并用透明胶带覆盖鸡蛋顶部的孔。将它们放入加湿的鸡蛋孵化器中，直到E15进行解剖。注射胶质母细胞瘤或GBM干细胞或在E15处表达绿色荧光蛋白的GSC后在体内E5视顶形成的肿瘤如图所示。

GSC附着在心室表面并在脑壁中形成浸润性肿瘤。在该实验中使用四种颜色来识别五个特征，绿色GSC，白色细胞核，白血管，蓝色整合素α-6和红色SOX2或红色Nestin。这些数字表明，GSC存在于您的血管中，并且似乎正在沿着它们迁移。

此处显示了旋转3D体积渲染到体内GSC肿瘤的固定和免疫染色切片的电影。