Establishing the 3D Stromal Monoculture

首先，取一管hBM-MSCs并通过离心沉淀它们。弃去上清液并将沉淀重悬于适当体积的基础培养基中。然后，准备含有所需体积的基础培养基的50毫升锥形离心管，并补充有相应的生长因子。

最后，从储备溶液中加入hBM-MSCs，稀释度为1至66.67，以达到每毫升第五个细胞的1.5乘以10的浓度。去除覆盖在96孔水凝胶板上的聚丙烯粘合剂膜以播种板。通过将吸气器尖端靠在孔壁上并缓慢向内孔边缘移动，小心地吸出覆盖水凝胶的储存缓冲液。

接种时，定期混合细胞悬液以保持混合物均匀，并向板的每个孔中加入200微升细胞悬液。然后，在潮湿的气氛中将培养物保持在37摄氏度和5%二氧化碳。或者，使用自动洗板机，吸液喷嘴设置在距离板架至少 3.8 毫米并朝向孔边缘的位置，然后吸出储存缓冲液。

通过用血清移液管混合细胞并将等数量的细胞分配到板孔中来播种板。通过具有五倍物镜的明场显微镜监测培养物的发展，并在接种后约30分钟获取参考图像以评估添加的细胞数量。