Establishing the 3D Stromal-Endothelial Cell Co-Culture

首先，取生长至80%至100%汇合水平的GFP-HUVEC沉淀，并将细胞重悬于适当体积的基础培养基中，以达到每毫升储备溶液10至第七个细胞的浓度。准备50毫升锥形离心管，其中包含所需体积的基础培养基，并补充有相应的生长因子。从储备溶液中加入GFP-HUVECs，稀释度为1至66.67，以达到每微升第五个细胞的1.5乘以10的浓度。

然后从含有基质单一培养物的平板中吸出培养基，并在每孔中加入200微升制备的GFP-HUVECs悬浮液。在37摄氏度的5%二氧化碳中在潮湿的气氛中孵育，每三到四天更换一次培养基。使用五倍物镜通过明场和荧光显微镜监测培养物的发展。

从仅显示GFP-HUVECs的明场和荧光图像中可以观察到培养物之间的差异。没有任何生长因子的培养物似乎不太发达，然而，在FGF-2存在下观察到更快的发育。相比之下，明场图像在BMP-2存在下显示出最密集的培养物。

然而，在含生长因子的条件下形成的血管样网络和最广泛和相互连接的网络都是用FGF-2形成的。