Bleaching and Plating Caenorhabditis elegans P0 Generation Embryos onto RNAi-NGM plates

通过在接种有OP50-1细菌的35毫米标准NGM板下挑选三到四个妊娠秀丽隐杆线虫成虫，为RNAi遗传测定准备动物。四天后，使用补充有Triton X-100的800微升M9缓冲液将妊娠成虫从板上洗掉到1.5毫升管中。重复洗涤并将蠕虫拉入一根管中。

将蠕虫以1,000G离心1.5至2分钟后，吸出上清液，留下100μL而不干扰蠕虫沉淀。向每个含有蠕虫颗粒的试管中加入650微升双蒸水。为了从收集的群体中分离秀丽隐杆线虫胚胎，加入250微升新鲜制备的漂白溶液并启动计时器。

每隔一到两分钟，彻底涡旋试管。五分钟后，在立体镜下监测成虫的降解。继续涡旋，直到蠕虫完全溶解，只剩下胚胎。

这通常需要六到七分钟。立即以1,000G离心管1.5分钟并吸出上清液，留下约50至100微升的上清液与胚胎。向胚胎中加入一毫升补充有Triton X-100的M9缓冲液并涡旋。

离心悬浮液并重复洗涤两次。最后一次洗涤后，吸出上清液并在管中留下约100微升。用分离的胚胎涡旋试管，并从每个试管中吸取两微升到标记的载玻片上两次。

使用计数器对胚胎进行计数，以估计每微升胚胎的浓度。为了开始半同步的种群增长，将大约 250 个胚胎转移到每个含有大肠杆菌 HT115 细菌的 RNAi NGM 板上，具有 GFP 或对照 RNAi 载体。让液体吸收。

用RNAi处理的P-naught代在21°C下孵育4天。