Manufacturing Chimeric Antigen Receptor T-Cells Using an Automated Cell Processor

首先打开仪器，从触摸屏界面选择 T 细胞转导过程。单击“运行”以启动该过程，然后按照屏幕上提供的说明进行操作。在周边输入屏幕上，输入操作员姓名首字母、管路组、批号和到期日期。

接下来，在流程设置屏幕上选择完整流程。现在，选择两瓶CD4、CD8选择方法的筛选试剂。安装管道组，确保所有诱饵连接都设置紧密，并按照触摸屏上的说明完成上下完整性测试。

现在，按照屏幕上的指导连接培养基和处理缓冲袋，并开始自动灌注管路组。一旦出现转移池产品屏幕，将解冻的 T 细胞产品转移到 150 毫升转移袋中，并将其无菌焊接到管路组的应用袋上。接下来，使用质控袋从应用袋中获取样品，并使用血液学分析仪进行细胞计数。

将 CD4 和 CD8 试剂瓶连接到管路组，并开始 T 细胞富集的选择过程。富集后，从再应用袋质量控制袋中取出所选细胞的样品。输入所需的细胞浓度和起始编号。

现在，根据屏幕上的说明连接一小瓶活化试剂。然后，将二氧化碳浓度设置为5%，将培养室温度设置为39摄氏度。使用增强型喂养方案作为起点建立活性矩阵，并将各个步骤修改为特定的优化方案。

在这种情况下，将转导活性时间设置为接种后 24 小时，将培养物洗涤设置为转导后 48 小时。将激活振荡器时间设置为在开始培养洗涤后 30 分钟开始。删除任何中型袋子交换和废旧袋交换活动，因为它们不再需要。

然后，按屏幕上的确定开始种植。让仪器自动将所需体积从再应用袋泵入培养室。在装有冷介质的 20 毫升试剂袋中解冻并制备计算出的载体体积，以达到 10 毫升的最终体积。

调整活动矩阵，将转导时间设置为未来两分钟，然后按“确定”启动转导活动。按照屏幕上的说明将载体袋无菌焊接到管路组上。根据实际转导开始时间修改活性基质，并在转导后 48 小时进行培养洗涤。

将激活振荡器的时间安排在培养物洗涤后 30 分钟。最后，确保媒体交换在第六天下午 2：00 进行。按下样品按钮并按照屏幕上的说明从活性培养物中获取质控样品。

将样品分成三个一毫升的等分试样进行各种分析。准备最终的配方缓冲液，为以后的冷冻保护剂制备留出一部分。接下来，调整活动矩阵，将培养结束时间设置为未来两分钟。

将最终配方缓冲液连接到管组并开始收获。密封并取出目标细胞袋。该袋子包含准备输注或冷冻保存的 CAR T 细胞。

临床试验的放疗运行率为46%，这表明TCT过程有效地促进了细胞扩增。最终产物的细胞活力在88%至94%之间，CD3 T细胞纯度为89%至93%内毒素、支原体、无菌性、复制能力慢病毒和残留白血病细胞均未检测到。