Thawing and Culturing Cryopreserved Blood for Cytokinesis Assay

要准备培养孔，请在 24 孔板的盖子上标记供体代码 A 或 B、日期和剂量。从液氮中取出含有人血的冷冻小瓶，并在温水浴中部分解冻，直到看到小冰晶。接下来，在层流罩中，小心地打开小瓶，以防止气泡溢出管内。

将小瓶的内容物重悬并转移到 15 毫升离心管中。在轻轻旋转试管的同时，滴加一毫升预热的PBS。使用 P-1000 移液器混合 PBS 和血液。

为了稀释和均匀洗涤，将 7 毫升预热的 PBS 加入 15 毫升管中，并通过移液混合。将血液以 180 g 离心 8 分钟。同时，用 500 微升 PBS 填充 24 孔板的未标记孔，并在 37 摄氏度下预热板。

离心后，小心地除去上清液，在管中留下约一毫升，而不会干扰调色板。使用移液管，将调色板重悬于剩余的上清液中。然后如前所述，逐渐将 8 毫升温热的 PBS 加入试管中。

离心重悬的血液。同时，向标记的孔中加入200微升RPMI培养基，并如图所示预热板。离心后，除去上清液，留下约80微升的上清液。

然后加入 280 微升胎牛血清并重悬调色板。将 180 微升细胞悬液转移到标记的孔中。将板在 37 摄氏度的二氧化碳培养箱中孵育 10 分钟。