要开始包被抗原，用包被缓冲液将卵清蛋白稀释至每毫升 5 微克。在 4 摄氏度下每孔用 100 微升卵清蛋白溶液包被 96 孔 ELISA 板过夜。第二天，用PBST清洗孔五次。
用 250 微升 1% BSA PBST 在 37 摄氏度下堵塞孔两小时。要制备 1000 X 血清稀释液，首先使用 0.5% BSA PBST 将 20 微升血清稀释至 1 毫升。然后取出 25 微升血清等分试样，并使用 0.5% BSA PBST 将其稀释至 500 微升。
将稀释至 1000 X 的 200 微升血清加入到包被板的第一行。然后向除第一行孔以外的所有孔中加入 100 微升 0.5% BSA PBST。将 100 微升从第一排转移到第二排，混合 10 次。
要制备不同浓度的血清用于 IgG 检测，请丢弃最后一排的 100 微升液体。接下来，稀释小鼠阴道灌洗液、支气管肺泡灌洗液、鼻腔灌洗液用0.5%BSA PBST和小肠灌洗液用20%胎小腿血清PBST。将板在 37 摄氏度下孵育一小时。
用PBST清洗孔五次。将 100 μL HRP 偶联山羊抗小鼠抗体加入适当的孔中，并在 37 摄氏度下孵育 40 分钟。用 PBST 洗涤孔 5 次后，加入 100 μL TMB ELISA 底物，并在光照保护区域孵育 5 分钟。
加入 100 微升 450 纳米终止溶液以终止反应。在酶标仪上测量 450 纳米处的吸光度。计算抗体滴度，将阳性反应值定义为对照小鼠组血清值的 2.1 倍。
纳米乳剂佐剂疫苗显著提高了血清中卵清蛋白特异性IgG、IgG1和IgG2a抗体滴度。当卵清蛋白与阳离子纳米乳包封的视黄酸佐剂时，阴道灌洗液和小肠灌洗液中特异性IgA水平显著升高。
