首先，分离并插管安乐死大鼠的肠系膜淋巴管。在输液室中对淋巴管加压，让它们平衡并产生稳定的自发收缩。然后用 Fura-2-乙酰氧基甲酯和 pluronic acid 在黑暗中孵育淋巴管 30 分钟。
孵育后，用负压真空清空整个浴液体积，然后用温度匹配的无试剂生理盐溶液重新填充三次。然后将淋巴管在黑暗中再孵育 15 分钟，以去除任何多余的指示剂并允许去酯化。将腔室转移到带有 LED 灯、20XS 荧光物镜、自取景适配器和用于 15 赫兹荧光捕获的相机的倒置荧光显微镜上。
将显微镜连接到配备成像软件的计算机，以记录荧光并执行边缘检测。激活 LED 光源和荧光系统接口。现在启动软件IonWizard。
在“文件”选项卡下，选择“新建”选项。然后转到“收集”选项卡并选择“实验”。加载所需的实验模板，然后单击“确定”。单击位于屏幕底部的“开始”按钮以启动实验。
接下来，调整屏幕上的迹线以按降序显示血管直径、分子、340 信号、分母、380 信号和比率。要修改 Y 轴刻度以获得更好的跟踪可视化效果，请转到“跟踪”，确保未选中“自动限制”，然后选择“编辑用户限制”。选择要调整的参数，输入轴的最小值和最大值，然后选择“确定”进行确认。
使用边缘检测软件，调整照明，使淋巴管壁显示为黑线。选择一个没有脂肪和碎屑的感兴趣区域或 ROI，并确保不要移动此 ROI。设置阈值，以便在整个收缩周期中都能检测到血管壁边缘。
激活光电倍增管后，使用 LED 照明器交替使用 340 和 380 纳米波长和 50 毫秒曝光以激发 Fura-2。捕获整个成像区域内 510 纳米和 15 赫兹的发射光谱。要测量信噪比，首先获得340和380荧光，淋巴管位于视野的中心。
然后将视野移动到浴缸的边缘，没有容器来捕捉背景。然后，将浴液与温度匹配的无试剂生理盐溶液交换，以去除多余的 Fura-2 指示剂。记录基线 Fura-2 荧光信号和约 30 分钟的自发收缩。
然后记录硝苯地平的累积浓度反应，并获得每种药物浓度的背景测量值。在每个实验结束时，用温度匹配的无钙生理盐溶液清洗淋巴管，以获得最小的Fura-2荧光信号和在没有钙离子的情况下淋巴管的最大直径。将浴溶液与含有10毫摩尔钙离子和离子霉素的温度匹配的生理盐溶液交换，以获得在钙离子饱和的条件下的最大Fura-2荧光信号和淋巴管的最小直径。
参数，包括钙尖峰振幅、基线钙和钙峰值，随着硝苯地平逐渐添加到灌注室中，表现出浓度依赖性降低。同时，收缩参数，如收缩、振幅和计算的流量也显示出逐步下降。曼哈顿图显示了个体淋巴管对节律性测量的反应，包括间隔、收缩时间和放松时间。
