通过在小鼠中吸液性淋巴血管阻止淋巴流

此方法以最小的淋巴内皮细胞损伤中断淋巴流动，并精确控制阻断时间，可用于研究淋巴流如何影响淋巴结中的平衡和免疫反应。帮助演示这个程序的将是我实验室的研究生薛静娜。要准备注射装置，切割约30厘米的聚乙烯管。

将针尖 A 连接到管的一端。小心地将另一根针断开，将断裂的一侧连接到聚乙烯管的另一端。然后将针头 A 连接到一毫升的结核素注射器上。

使用前，立即在盐水中准备10：1氯胺酮-锡氨酸混合物。麻醉小鼠后，注射250微升的氯胺酮/木胺混合物内，确保完全麻醉与头趾捏。用剪发器在腿部周围剃毛，然后在腿部周围涂抹脱毛霜。

五分钟后，用湿润的组织擦去残留的毛皮和脱毛霜，然后用无菌水清洁腿部。在腿部周围喷洒 70%乙醇，对操作区域进行消毒。将鼠标放在易发位置，并使用手术胶带将手术区域露出右腿。

在贸易中，将5微升的1%埃文斯蓝色染料，或9厘米的液体从注射装置管到鼠标的右脚垫。轻轻按摩足垫，帮助液体进入淋巴血管。在解剖显微镜下，从波莱特叶的下边缘定位一个切口部位五毫米。

用一把剪刀，做一个大约五毫米长的小切口。然后使用精细的操作钳来拉伸切口并暴露收集的淋巴血管。识别导致流行淋巴结的两个发性淋巴血管。

使用针架，小心地将缝合针插入支点淋巴血管和下垂动脉之间。轻轻地将针头拉出，围绕发状淋巴血管。小心地拉缝合线，留下大约两厘米的缝合线。

使用针架帮助打结。轻轻按摩脚垫，以确保没有埃文斯蓝色染料通过缝合现场，然后用剪刀切割多余的字符串。缝合其他发性淋巴血管，然后用用于淋巴血管的相同缝合关闭皮肤切口。

对于假控制，在左脚垫中注入5微升1%的埃文斯蓝色染料，并按摩脚垫。用切口打开皮肤，然后闭合伤口，而不使血管破裂。当监测小鼠手术后，右腿应显示水肿，与埃文斯蓝色染料蔓延到大腿，而控制腿将显示埃文斯蓝色染料限制在脚垫。

手术后，在右脚垫和左侧立即注射10微升2%FITC。FITC注射后2、6和12小时，从安乐死小鼠的fossa收集流行淋巴结。小心地去除 pLNs 周围的佩里诺达尔脂肪组织。

将 pLN 嵌入最佳切割温度化合物中，将模干窦区域朝向低温模具的一侧。使用低温准备 20 微米冷冻部分。要确定 pLN 中的 FITC 分布，请用共和显微镜对低温部分进行成像。

在 FITC 注射后两、六和 12 小时拍摄的共和图像显示，在使发淋巴血管苏化后，FITC 在流行淋巴结中的积累大大减少。pLNS 中的残留 FITC 优先积聚在淋巴结鼻窦中。近脂肪组织的共生图像显示，当淋巴血管被苏化阻塞时，FITC进入组织时淋巴结鼻窦，但它没有有效地分布在整个淋巴结。

尝试此方法时，重要的是要记住，在血管和淋巴血管之间插入缝合针至关重要。此步骤的故障可能会使船只中断。执行此方法后，有可能为感染或其他免疫刺激的小鼠接种疫苗，以研究淋巴流如何调节免疫保护。

淋巴流的功能不被很好地理解。此方法可用于研究淋巴结中没有淋巴流动的细胞迁移。