小鼠肺移植物的双光子成像，用于实时研究细胞动力学和相互作用

首先，将开胸手术的插管小鼠放在成像室的底板上，打开的左胸朝上。用丝带将鼠标固定在它的脸上、前爪和尾巴上。将胶水涂在连接到顶板的盖玻片的底部。

接下来，降低顶板，直到盖玻片接触肺，让胶水接触肺表面。将盖玻片靠在肺上。给肺充气一到两秒钟，使胶水区域粘附在周围组织上。

在每个螺栓上放置一个拇指螺母并固定顶板。对于双光子成像，将带有鼠标的整个成像室放在显微镜载物台上。使用二向色滤光片分离来自 GFP 报告基因的信号，Q 点和胶原蛋白产生 SHG 信号。

接下来，以尽可能低的功率将钛蓝宝石飞秒脉冲激光器的激发波长设置为 890 纳米。在顶板上的盖玻片上涂抹一毫升水。现在将水浸物镜降低到水中并聚焦在肺表面。

打开底板加热器，将温度保持在 35 到 37 摄氏度之间。使用所选采集软件采集图像堆栈。移植后 24 小时时，相对于移植后 2 小时，肺中的中性粒细胞更多。