首先,将剪下的苍蝇胸部样品放入 2 毫升离心管中。向试管中加入 180 微升组织裂解缓冲液,然后以 3, 000 RPM 的速度彻底加入 20 微升蛋白酶 K.Vortex 10 秒,并在 56 摄氏度下孵育直至组织裂解。孵育后,再次涡旋样品 15 秒。
加入 200 μL 裂解缓冲液,涡旋充分混匀。然后加入 200 微升乙醇,再次涡旋 15 秒。接下来,将 DNA 吸收柱放入 2 ml 收集管中,并将混合物移液到收集柱中。
以 6, 000 G 离心 1 分钟。丢弃流出和收集管。将色谱柱放入新试管中,加入 500 μL 蛋白质去除缓冲液。
离心 1 分钟,弃去流出物。将色谱柱转移到新管中。加入 500 μL 脱盐缓冲液,以 20, 000 G 离心 3 分钟以干燥膜。
然后在膜上加入 100 μL DNA 洗脱缓冲液。在室温下孵育 1 分钟,然后以 6, 000 G 离心 1 分钟以洗脱 DNA。适当储存 DNA 样品。