9日龄小鼠新生儿肝外胆管和胆囊清扫术

许多评估肝外胆道系统的报告报告说，他们获得了样本，但没有获得样本的方式，这引发了可比性问题。该技术的主要优点是可以解剖整个肝外胆道系统，并且可以无创伤地去除污染细胞。我们的解剖方案通常可以应用于小鼠新生儿胆管疾病的实验方法，旨在解剖肝外胆道系统。

该方案的一些特征，例如，将胃附着在十二指肠上，可能有助于十二指肠闭锁的研究，以便通过胃表达的部分消化的乳汁正确定向。一开始，该技术可能需要一些时间进行培训。练习并遵循循序渐进的方法将提高速度和结果。

首先，将消毒和高压灭菌的器械放在手术台旁边的无菌表面上。在腹膜上切开后，沿着左额腋线将切口扩大到斩首的位置。用无创伤钳从左侧到右侧去除皮肤。

在显微镜下，握住脾脏周围的腹膜。轻轻地将其提起，直到腹膜类似于帐篷状结构，并在中心切一个一毫米的孔。等待腹膜帐篷充满空气。

在由下肋骨、腹部外侧区域和下膀胱区域构成的窗口中切掉腹膜。确保完全进入肝脏、胆管系统、胃、小肠和结肠。通过小心地将剑突拉到颅腹位置来检查胆囊和胆管。

避免镰状韧带撕裂，这可能导致胆囊从胆管系统撕裂。然后，释放剑突的拉力。轻轻拉下十二指肠以释放胆管系统。

然后，通过识别十二指肠进行下部 En-bloc 动员，十二指肠将胆管系统连接到十二指肠。切开十二指肠，向右侧约两厘米处。然后，切开幽门区域。

确保胃内容物存在于切割位置和十二指肠之间的幽门区域。要进行上部整体动员，请轻轻拉动剑突并进入镰状韧带。切开胆囊之间的镰状韧带一厘米，靠近剑突。

切开肝脏和胸部之间的连接结构，例如食道、下腔静脉、胸主动脉以及围绕肝脏裸露区域的所有韧带。此外，切断所有背侧剩余的组织连接。在20倍显微镜放大倍率下，将整体样品放在泡沫垫上。

通过在正确的解剖位置重新组织样本来组装样本。使用轻柔的运动，使十二指肠的口腔和口腔部分变平。使用无创伤镊子，在十二指肠处开始扁平运动，并继续到切削刃。

然后，在十二指肠的口腔部分抚平胃的白色浆状内容物。识别十二指肠的口腔和腹侧部分，以排除可能的胆管旋转。在解剖胆管之前切掉大块残留的肝组织。

经过几次刮擦动作后，将样品转移到泡沫垫上的清洁位置。使用背景中较少挤压的肝组织来优化EBDS和不需要的细胞之间的区分视图。处理肝十二指肠韧带，直到孤立的EBDS仍然存在。

观察肝动脉和门静脉以白色和非常脆弱的细丝形式出现，在十二指肠上口服约三到五毫米。小心地，用轻轻拉动左侧来取下这根细丝。确保刮擦运动从胆管系统开始并通向肝脏边界。

使用该协议，从9天大的小鼠新生儿中解剖EBDS。从胆囊到十二指肠的孤立EBDS长度小于10毫米，脆弱胆总管的直径从0.05到0.2毫米不等。苏木精伊红染色在具有开放腔的EBDS的纵向切片上进行。

在管腔周围发现胆管细胞为单层，并染得更深。研究人员应共享和标准化解剖和注射方案等操作技术，以提高其研究和结果的可比性和快速可用性。先前的解剖对于组织学和单细胞方法是有利的，例如分离胆管内和胆管外细胞，因为它可以减少细胞培养污染。