使用 SUMO Fusion Tag 表达和纯化端粒 DNA 结合蛋白 TRF2

为了开始转化大肠杆菌 BL21 DE3 细胞，在冰上解冻 50 微升等分的感受态细胞悬液。将 1 微升 pET 28a Sumo TRF2 质粒的 DNA 添加到感受态细胞悬液中，然后轻轻旋转试管以混合悬浮液。转化后，将 100 微升细胞悬液涂布在含有 50 微克/毫升卡那霉素的 luria bertani 或 LB 琼脂平板上。

将细胞在 37 摄氏度下孵育过夜。第二天，挑选转化细胞的集落，并在 5 毫升 LB 培养基中培养，每毫升补充 50 微克卡那霉素。在 37 摄氏度下孵育 18 小时，以 220 RPM 的速度摇动。

孵育后，以 1 毫摩尔 IPTG 作为终浓度诱导培养物。在 20 摄氏度下孵育 17 小时以促进蛋白质表达。将粗蛋白提取物和上样缓冲液上样到 SDS-PAGE 凝胶上。

最初在 100 伏电压下运行样品 30 分钟，然后在 tris-甘氨酸缓冲液中以 120 伏电压运行50 分钟。然后，用考马斯蓝染色以观察蛋白质表达。对于蛋白质纯化，将粗蛋白提取物在 38， 000 G 下在 4 摄氏度下离心 40 分钟，然后通过 0.22 微米注射器过滤器过滤上清液。

将过滤后的上清液上样到结合缓冲液中的预平衡镍柱上。用结合缓冲液洗涤色谱柱，并用制备的咪唑梯度洗脱蛋白质，收集 12 个级分，每个级分 1 毫升。将甘油加入终浓度为 50% 的浓缩和缓冲液交换蛋白中以储存。

TRF2 在大肠杆菌中的表达得到成功证明，如 SDS-PAGE 所示，其中对应于 TRF2 的不同条带在诱导前后出现。