这项工作是由国立卫生研究院，国家普通医学科学研究所（R01GM063075）和国家补充和替代医学中心（R01AT05076）赠款支持。

1。败血症动物模型的建立<ol><li>小鼠麻醉与氯胺酮（75毫克/千克，肌肉注射，IM）和甲苯噻嗪（10毫克/千克，IM），并放置在仰卧位。 </li><li>鼠标的脚，用胶带固定，以确保一个稳定的位置。 </li><li> 3个交替的优碘或其他皮肤消毒和酒精擦洗干净腹部。然后，让一个15毫米的中线切口，显露盲肠。 </li><li>盲肠尖约5.0毫米用4-0丝线结扎的盲肠，然后用22号针头穿刺盲肠结扎残端一次让粪便的挤压。 </li><li>盲肠立即更换回到其正常的腹腔内的位置。 </li><li>关闭切口部位两层，首先关闭的可吸收缝合线的腹部肌肉，然后关闭皮肤伤口剪辑或不可吸收缝线。 </li><li>用0.5毫升生理盐水复苏鼠标和一个单一的做亚胺培南（0.5毫克/鼠标，皮下注射），完成后立即手术本身。 </li><li>返回鼠标到一个干净的笼子里，免费获得食物和水。 </li><li>在不同时间点后电或组件，​​中草药提取物腹腔注射。 </li><li>两个多星期监测动物的生存。垂死的动物展出站立困难，濒死呼吸，严重的肌肉萎缩和不受控制的出血应过量二氧化碳吸入安乐死。 </li><li>重要的是要注意的循环细胞因子水平在这些研究中的重要参数。各种止痛药已被证明影响细胞因子的释放和活动，因此一直有意避免在术后护理。 </li></ol> 2。中草药提取物的制备<ol><li>热水（85℃）中提取1-4小时（叶，1小时和4小时的根）的草药。 </li><li>离心水luble分数（3300克，20分钟，4°C间），除去不溶性微粒。 </li><li>滤液通过0.2微米过滤的上清。 </li><li>明确水溶性滤液分数，然后分次使用超滤Centriprep YM-10离心式过滤器（4305。目录，Millipore公司）。 </li><li>导致低（&lt;10 kDa的）和高（&gt; 10 kDa）的分子量组分（一三五）筛选的HMGB1抑制巨噬细胞的文化活动。 </li><li>腹腔注射抑制HMGB1的中草药提取物，或在24小时后电组件，以评估其疗效。 </li></ol> 3。腹膜巨噬细胞的分离<ol><li>硫乙醇酸盐肉汤（4％，2.0毫升）管理进入正常小鼠腹腔。 </li><li>原发性腹膜巨噬细胞在3如先前所述10天收获。 </li><li>巨噬细胞预培养1为辅的DMEM培养基（Gibco BRL公司，大岛，纽约）0％小牛血清（FBS），2 mmol / L谷氨酰胺，1％青霉素。 </li><li>轻轻洗净，用壁巨噬细胞，培养，无血清OPTI-MEM中我前两小时，细菌内毒素刺激的媒介（脂多糖，内毒素，大肠杆菌0111：B4，Sigma-Aldrich公司）。 </li><li>在LPS刺激后16小时，在培养基中HMGB1水平确定免疫印迹分析11。 </li><li>带强度相对量化使用NIH图像1.59软件与纯化的HMGB1产生的标准曲线，以确定与HMGB1水平。 </li></ol> 4。代表结果 1。电引起全身和局部炎症。 电外科手术的几个小时内，动物表现出败血症的临床症状，包括立毛，嗜睡，拥挤，食物和水的摄入量减少。发展与连续全身严重的腹膜炎的动物感染通常48 - 96小时内死亡。然而，甚至年龄，性别，遗传背景相匹配的动物可以回应中电手术在败血症实验过程中的区别方式。例如，在48小时后电，而一些动物可能已接近垂死状态（ 如图1定义），其他人可能会保持在一个非垂死的状态。 循环细胞因子的综合调查结果显示，在多种细胞因子水平之间的巨大差异，在小鼠的垂死和非垂死状态（ 图1）12（IL-6架KC，MIP-2，人sTNFR1）。值得注意的是，这些炎症介质已被列为败血症的替代指标，因为他们的水平在12-14实验或临床败血症15致命结果的可靠预测。此外，中电也引起了当地的各种亲和抗炎细胞因子和趋化因子的释放。例如，在48小时电后，大量的细胞因子（如IL-6）和趋化因子（KC和MIP-2）还可以测量血液中不仅系统，而且在当地的腹腔灌洗液（ 图2）。 2。抑制HMGB1的中草药提取物或成分的筛选。 巨噬细胞的培养，我们能够评估在抑制内毒素诱导的HMGB1释放的各种中草药提取物或组件的能力（ 图3）。鉴于其在抑制HMGB1释放的能力，我们进一步探讨其疗效在动物模型败血症。鉴于HMGB1的积累在实验败血症8月底和长期动力学，首次剂量的HMGB1抑制剂败血症发病后24小时-时间点小鼠败血症的明显迹象，包括嗜睡，腹泻，毛发直立。如图4所示，延迟和重复管理的一个主要的绿茶Çomponent，儿茶素-3 -没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG），败血症发病后24小时开始，显着救出致命的败血症小鼠12。即使口服，EGCG致命的败血症小鼠仍然获救，显着提高动物的存活率从16％到44％，16。这将是重要的，以确定是否与几种中药成分的组合疗法可以实现在败血症动物模型的一个重要更好的保护。两者合计，这些实验数据证实了我们的画面新颖的治疗药物，使用CLP诱导的脓毒症动物模型的方法。 5。代表结果<img alt="图1" src="/files/ftp_upload/3926/3926fig1.jpg" /> 图1。循环的替代指标水平显着高于化粪池动物接近垂死状态。BALB / C小鼠败血症，中电和监测疾病迹象的发展。在后期，败血症（52小时后电）3正常小鼠（电），3脓毒症小鼠接近垂死状态，和3个非垂死的状态脓毒症小鼠采血。汇集从各组血清，测定细胞因子抗体阵列配置文件。请注意在几个不同群体之间的替代指标的相对水平的巨大差异。 DOI适应10.1371/journal.pone.0001153.g006从出版商授予许可。 <img alt="图2" src="/files/ftp_upload/3926/3926fig2.jpg" /> 图2。中电在48小时后电BALB / C小鼠的局部和全身的细胞因子和趋化因子的检测受到败血症，血液或腹膜透析液，在48小时后电收获。细胞因子抗体阵列测定混合血清或腹腔灌洗液中的一些细胞因子和趋化因子的相对水平，表现为任意单位（非盟）。作为控制，血液和腹膜透析液SAmples取自正常健康的动物（电）不开腹手术。 <img alt="图3" src="/files/ftp_upload/3926/3926fig3.jpg" /> 图3。中药成分的剂量依赖性地抑制巨噬细胞培养小学内毒素诱导的HMGB1释放。小学小鼠腹腔巨噬细胞刺激脂多糖，在没有或中草药成分的存在（例如，EGCG，15微米）。在LPS刺激后16小时，在培养基中HMGB1水平，Western blot分析确定。 DOI适应10.1371/journal.pone.0001153.g006从出版商授予许可。 <img alt="图4" src="/files/ftp_upload/3926/3926fig4.jpg" /> 图4。中草药成分救出致命的败血症小鼠 BALB / C小鼠中电受到致命的败血症，中草药成分（儿茶素）腹腔注射+24 +48，+72小时发布败血症的发病。一个监测IMAL存活长达两周。采用Kaplan-Meier法比较组之间的死亡率差异。 *，P &lt;0.05与生理盐水。 DOI适应10.1371/journal.pone.0001153.g006从出版商授予许可。

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AES和硬件共同发明专利申请有关的HMGB1抑制剂为败血症的潜在治疗药物（丹参酮）。

在实验室中，败血症的几种动物模型已受聘了解败血症的发病机理，以开发潜在的新疗法。成功翻译成败血症的临床应用前的动物实验研究及其临床意义仍然是一个辩论的题目。虽然对早期细胞因子的中和抗体（如肿瘤坏死因子）在菌血症/内毒素血症17,18动物模型的保护，他们实际上恶化19败血症动物模型的生存。同样，最抗TNF药物未能表现出败血症20-22临床试验的疗效。...

<table border="1"><tbody><tr><td> 试剂名称 </td><td> 公司 </td><td> 目录编号 </td></tr><tr><td>优碘</td><td>普渡产品LP </td><td> 25655-41-8 </td></tr><tr><td>亚胺培南</td><td>默克制药公司</td><td> 9882821 </td></tr><tr><td>氯胺酮盐酸</td><td>赫士睿公司</td><td> RL-0065 </td></tr><tr><td>甲苯噻嗪</td><td>劳埃德实验室</td><td> 4821 </td></tr><tr><td> autoclip </td><td>碧迪</td><td> 427631 </td></tr><tr><td> 4-0丝线缝合</td><td> roboz </td><td>被测-15-2 </td></tr><tr><td> surflo静脉导管</td><td> Terumo公司</td><td> SR * OX2419CA </td></tr><tr><td> RayBio小鼠细胞因子抗体阵列</td><td> RayBiotech，公司</td><td>空空导弹的菜园3 </td></tr><tr><td>巯基乙酸</td><td>碧迪</td><td> 211716 </td></tr></tbody></table>

use of animal model of sepsis to evaluate novel herbal therapies

败血症是指从微生物感染导致的全身炎症反应综合征。它已经在动物经常模拟一些技术，包括输注外源性细菌毒素（内毒素血症）或细菌（菌血症），以及盲肠结扎穿孔（CLP）1-3盲肠手术穿孔。电使细菌溢出和粪便污染腹腔，阑尾炎穿孔或憩室炎的临床模仿人类疾病。控制败血症的严重程度，最终死亡率反映，可以通过改变盲肠穿刺2针的大小手术。在动物实验中，中电诱发心血管疾病，代谢和免疫反应类似，双相血流动力学观察临床过程，在人类败血症3。因此，中电模型被认为是最有关的临床实验败血症模型1-3。/ P&gt; 各种动物模型已被用来澄清复杂的实验性败血症的发病机制。败血症的致命后果，部分原因是由于早期细胞因子的过度积累（如肿瘤坏死因子，IL-1和IFN-γ）4-6和晚期炎症介质（例如，HMGB1的）7。早期炎性细胞因子相比，晚长效调解员有更宽的治疗窗的临床应用。例如，开始CLP 后 24小时内的HMGB1的中和抗体的延迟管理，仍然救出小鼠致死8,9，建立HMGB1的后期调解作为一个致命的败血症。后期长效调解员发现HMGB1的败血症治疗，使用中国传统中药的发展已开始了新的调查领域。在本文中，我们描述了一个CLP诱导的脓毒症的过程，其使用中草药筛选用于HM的GB1-靶向治疗。

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Use of Animal Model of Sepsis to Evaluate Novel Herbal Therapies

败血症是指从微生物感染导致的全身炎症反应综合征，可以被称为盲肠结扎穿刺（CLP）外科技术模拟。在这里，我们描述了一个方法来使用CLP诱导的动物模型，筛选治疗药物的药材。

脓毒症动物模型，用于评估新型草药疗法

Sepsis refers to a systemic inflammatory response syndrome resulting from a microbial infection. It has been routinely simulated in animals by several ...

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Research

JoVE Journal

Medicine

19.3K 次观看.  North Shore – LIJ Health System. 败血症是指从微生物感染导致的全身炎症反应综合征，可以被称为盲肠结扎穿刺（CLP）外科技术模拟。在这里，我们描述了一个方法来使用CLP诱导的动物模型，筛选治疗药物的药材。