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General Laboratory Techniques

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制备组织学样品用于光学显微镜技术

Overview

组织学是指对细胞和组织的研究,它通常需要借助于光学显微镜。根据样品本身属性如大小,硬度以及处理后使用的染色技术和下游应用的不同,制备组织学样品的过程也会有很大不同。如本视频中介绍的,样品的制备通常是从固定步骤开始,用以防止濒临死亡细胞所释放出的酶对样品的降解。固定后,样品会被置于包埋试剂来使样品完全被支撑起来。最常用的是石蜡,但是其他的一些试剂,例如含甘油的冷冻试剂和琼脂也可以在切片的时候用于包埋样品。然后在切片机或其他切片仪器中将样品切割成厚度为几微米到几毫米的薄片。切片之后,薄片会被固定在载玻片上,根据需要进行染色以获得特定的标记,而后在显微镜下成像。

Procedure

组织学这一术语是指对组织和细胞显微结构的研究。正确地制备用于光学显微镜技术的组织学样品对于从组织样品中得到高质量的结果至关重要。

几乎所有的组织学操作过程都有三个主要步骤。第一,固定样品,这是为了保存组织并减缓组织降解过程。第二,将样品浸没于包埋试剂中,这种试剂具有和组织相似的机械性能。第三,包埋之后,样品将被切片,也就是被一种称为切片机的精确切片工具切成薄片。本视频将讲述这些常规步骤以及与它们相关的一些概念。

组织固定是非常重要的步骤,能够保持细胞和组织成分并保持它们原来的结构。细胞死亡后,自然产生的酶从细胞器中释放,开始降解用来保持细胞和周围组织的结构完整性的细胞内和细胞外的蛋白质。固定步骤能够通过抑制这些酶降解蛋白质以及掩盖酶的作用位点使其不被识别来防止降解的发生。

固定的两个主要机制是交联作用和凝结作用。交联作用涉及到在蛋白质内部和蛋白质之间共价键的形成,他使得组织硬化从而抵抗降解。凝结作用是指使用化学溶剂,例如酒精,对蛋白质进行脱水,使得蛋白质的三维结构变形,从而蛋白质的疏水区域会转移到表面。凝结固定可以帮助包埋试剂如石蜡,渗入到组织内部。</

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