该方法有助于回答血管组织工程领域关键问题，如监测工程师血管生长动态和长期培养过程中重塑。使用光学相干断层扫描（OCT）的主要优点是，它是一种现成的实时和无损成像策略，用于描述工程容器的结构特征和改造过程。演示程序也将是刘尚民，和马文涛，我的实验室技术人员。

要开始此过程，请根据文本协议中所述，将 PGA 脚手架在每升氢氧化钠中浸渍 PGA 脚手架一分钟，以调整网格的空间结构。然后，将脚手架浸泡在组织培养级水中三次，每次两分钟。每次用纸巾轻轻拍干脚手架。

然后，用鼓风机将发动机罩中的脚手架晾干一小时。为了组装用于 OCT 成像的生物反应器和 y-结，首先，将自行开发的玻璃圆柱形生物反应器、PGA 支架、硅胶管、生物兼容管、连接器、搅拌棒和设备浸泡在 95% 乙醇罐中组装两个小时。将 PGA 支架通过生物反应器的侧臂，用连接器连接到一侧，以及使用用于提供 OCT 导丝的 y 结到另一侧。

同样地在生物反应器中组装另一个 PGA 脚手架。用 4-0 缝合线拧紧聚四氟乙烯，将聚四氟乙烯安装到生物反应器唇上。将生物反应器再次放入乙醇罐中一小时，然后随着鼓风机在发动机罩中干燥过夜。

现在，通过标准的外植技术将人类脐动脉平滑肌细胞从人类脐动脉中分离出，在将细胞保存到PGA支架中的原因中，避免生物反应器底部任何细胞悬浮液滴滴。此外，在细胞座后尽快用硅胶塞盖盖住生物反应器，以防止污染。扩大并保持细胞在平滑的肌肉生长介质。

将人体脐动脉平滑肌细胞在上述培养基中每毫升500万细胞的浓度播种到PGA脚手架上。在生物反应器中放置一个 sir 棒后，盖住硅胶塞盖，该盖有一个进料管和三个短管段，用于气体交换。将 PTFE 0.22 微米过滤器连接到每个换气管，并在进给管上安装一个肝素盖。

以每分钟 13 轮的搅拌速度调整搅拌杆。然后，将玻璃生物反应器、硅胶塞盖和PGA脚手架组装到培养系统中。让细胞坚持45分钟，每15分钟倾斜一次生物反应器，并站在左侧和右侧。

现在，将LOO-OH-YEE泵、磷酸盐缓冲盐水袋和驱动器与生物相容管连接，以创建大量系统。打开驱动器以用 PBS 填充管子。将整体生物反应器放在加湿培养箱中，在 37 摄氏度下 CO2 为 5%。

用450毫升的培养剂填充培养室。在静态培养下种植种子脚手架一周，每三到四天更换培养基，通过喂食管吸气一半的旧培养基，用同等数量的新鲜培养基重新填充反应器。为了准备用于 OCT 成像的大量系统，请泵送 PBS 袋中的液体，通过生物相容管循环并回袋。

打开驾驶员的功率，以每分钟 60 次的频率和 120 毫米汞的输出收缩压调节泵设置。根据组织工程血管培养的需要调整机械参数。单击运行按钮，使大量系统正常工作。

在静态培养一周后，通过迭代加压生物相容管，为容器提供三周的固定脉动模拟。使用光源确保轴向分辨率为 10 到 20 微米，图像深度为 1 到 2 毫米，以基于频域 OCT 血管内成像系统识别组织工程血管（TEVBs）的结构。打开电源开关并打开图像采集软件 将光纤成像导管连接到驱动电机和光控制器，并实现导管自动退机功能。

将图像采集速率的参数设置为每秒 10 帧，自动回退速度为每秒 10 毫米。现在，用18规格的针头通过肝素盖将成像导管连接到y-结。将导管放入硅胶管中，在将 PGA 支架加载到生物反应器上之前，确定 PGA 网的结构紧固性。

现在，将导管尖放在感兴趣的区域。调整回拉设备并检查图像质量。以一天、四天、七天、十天、14天、17天、21天和 28 天的文化时间为每位 TEBV 获取图像。

通过实时观察TEBV微观结构（包括表面形态、内部结构和组成）按顺序保存这些图像。重复测量三次，每次对工程容器进行可靠的测量。使用图像捕获软件在整个测试过程中捕获一系列图像。

要使用图像分析软件测量组织工程血管壁厚，首先选择要分析的图像。然后，单击跟踪工具，使用软件自动识别组织工程血管的内侧，并手动绘制外侧草图。屏幕上将显示厚度图。

重复测量五次，以可靠地测量结构。考虑使用两个独立调查员有义务获取信息。打开培养物完成后放置在生物反应器上的硅胶塞盖，丢弃培养基。

松开生物反应器唇中的聚四氟乙烯，用剪刀从聚四氟乙烯的外侧切割硅胶管。从生物反应器中采集TEBV，并把它们切成部分进行扫描电子显微镜检查。拉出支撑硅胶管，用 4% 的功率甲醛固定部分。

执行常规组织学染色与质量的三色和西兰红检查胶原蛋白和PGA的形态。要评估PGA含量和胶原蛋白成分，请通过偏振显微镜观察具有红色染色的组织学样本。OCT图像与经过四周培养后对特博夫组织病理学的发现进行比较。

与组织学评估相比，OCT 图像显示了紧凑的微结构和特定组件。培养基、硅胶管、TEBV 和 PGA 片段可见。马森的三色染色表明胶原纤维分布在一定方向，以及工程容器介质层的PGA残留物。

天狼星红色染色通过偏振显微镜显示PGA残留物和胶原蛋白成分。工程容器的扫描电子显微图展示了紧凑的显微结构。同时，这种宫内成像模式采用无损、易监测的TEBV，包括长期培养中的改造过程和视觉形态原位。

如这里所示，通过TEBV厚度的比较，重塑发生得更早，形态变化在动态组中表现得更为明显。这项技术为血管组织工程领域的研究人员探索结构特征和工程容器的长期改造过程铺平了道路。通过极化显微镜与 OCT 成像清晰显示聚合物残留物可能有助于评估脚手架的降解。