小鼠肺气肿评价持续压力下的肺固定

固定装置内的恒定压力使肺部保持合理膨胀状态，产生一个组织学肺标本，适合评估轻度香烟烟雾诱发肺气肿。该模型的主要优点是，它可以修复许多肺在同一时间使用相同的恒定压力，没有肺崩溃或通缩。演示这个程序的将是 Naoko Arano， 一个研究生从我的实验室。

在确认对反射运动缺乏反应后，沿着小鼠的中线在皮肤和肌肉组织进行切口，瞄准头型区域，并横向切割以创造更宽的工作空间。暴露膜片层后，用钳子刺穿组织并打开胸腔空间。切开胸骨区域，使肺部和心脏被可视化。

切左中庭和右心室将连接到灌注泵的 24 量表管插入右心室区域，并将管管插入脑腔区域，直到到达肺动脉。然后，打开泵，用大约200毫升PBS将组织吸气一小时，直到所有的肺组织都变成白色。

在灌注结束时切割气管、肺和心脏周围的结缔组织，并使用缝合线将右主支气管绑起来。接下来，收获右肺的所有个体叶，将左肺的心脏和叶放入含有适当固定剂的单个10毫升注射器中。缩回柱塞，在注射器中产生真空，使肺部膨胀，并从注射器中去除肺部。

将 20 量表管插入气管，并使用缝合线将管管固定到位。将装满固定剂的一毫升注射器连接到管内，并给肺部加注额外的固定剂，以检查泄漏。确保插入位点已固定，以防止肺标本在固定过程中从肺板分离。

然后将组织转移到肺固定压力设备，取出样品，并在固定期结束时用结绑掉气管。将肺样本插入的肺固定压力设备的下部组件通过 20 量表管连接到甲醛流尖端，并配有三向止动器。压力来自下部和上部隔间之间的固定器的不同表面水平。

压力差为 25 厘米的水，但高度调节旋钮可用于将压力调节到 25 到 30 厘米的水。泵连接下部和上部容器，在固定表面高度中保持 25 厘米的差异，并指示代理的流动。经过48小时的固定后，SMP30敲除小鼠的肺部暴露在环境空气中，不会表现出明显的空域扩大。

然而，在SMP30淘汰暴露于慢性香烟烟雾的小鼠中观察到大量空域扩大和肺肺壁破坏。此外，在烟雾中暴露的SMP30敲击小鼠中，肺标本的线性截取和破坏性指数明显高于暴露在空气中的动物。我们的实验室使用10%的甲醛，但研究人员可以根据他们的实验需要使用其他固定剂。

正如我们所报告使用演示的固定系统肺样本可以从各种小鼠肺气肿模型中采集，用于其形态评估。由于固定剂是危险的，始终穿戴适当的人员防护设备，并在通风良好的房间工作。