고정 장치 내의 일정한 압력은 경증 담배 연기 유도 기종을 평가하기에 적합한 조직론적 폐 표본을 생성하는 합리적으로 팽창된 상태에서 폐를 유지합니다. 이 모델의 주요 장점은 폐 붕괴 또는 디플레이션없이 동일한 일정한 압력을 사용하여 동시에 많은 폐를 고칠 수 있다는 것입니다. 절차를 시연하는 것은 내 실험실에서 대학원생 인 나오코 아라노가 될 것입니다.
반사 운동에 대한 반응의 부족을 확인 한 후 마우스의 내측 라인을 따라 피부와 근육 조직에 절개를하고, 세프랄 영역을 목표로하고, 더 넓은 작업 공간을 만들기 위해 측면으로 잘라. 다이어프램 층을 노출 한 후 집게로 조직을 뚫고 흉부 공간을 엽니다. 폐와 심장이 시각화될 수 있도록 흉골 부위를 잘라냅니다.
그리고 왼쪽 심실과 오른쪽 심실을 잘라. 관류 펌프에 연결된 24 게이지 캐뉼라를 오른쪽 심실 부위에 삽입하고 폐 동맥에 도달 할 때까지 캐뉼러를 세팔 영역으로 안내하십시오. 그런 다음, 펌프를 켜고 모든 폐 조직이 백색으로 변경될 때까지 PBS의 약 200 밀리리터로 조직을 1시간 동안 인퓨즈합니다.
관류의 끝에서 기관, 폐 및 심장을 둘러싼 결합 조직을 잘라 내고 봉합사를 사용하여 올바른 주요 기관지를 묶습니다. 다음으로, 오른쪽 폐의 모든 개별 엽을 수확하고 왼쪽 폐의 심장과 엽을 적절한 고정제를 포함하는 개별 10 밀리리터 주사기에 넣습니다. 플런저를 철회하여 주사기에 진공을 만들어 폐를 팽창시키고 주사기에서 폐를 제거합니다.
기관지에 20 게이지 캐뉼라를 삽입하고 봉합사를 사용하여 캐뉼라를 제자리에 고정시하십시오. 캐뉼라에 고정으로 채워진 1 밀리리터 주사기를 연결하고 폐를 추가 고정 장치로 채우면 누출을 확인하십시오. 고정 시 폐 시편이 폐판에서 분리되는 것을 방지하기 위해 삽입 부위를 고정해야 합니다.
그런 다음 조직을 폐 고정 압력 장비로 옮기고 샘플을 제거하고 고정 기간이 끝날 때 매듭으로 기관체를 묶는다. 폐 시료가 삽입되는 폐 고정 압력 장비의 하부 성분은 20 게이지 캐뉼라를 통해 3방향 스톱콕을 사용하여 포르말린 흐름의 끝에 연결된다. 압력은 하부 구획과 상부 구획 사이의 고정의 다른 표면 수준에서 생성됩니다.
압력 차이는 25센티미터의 물이지만 높이 조절 노브를 사용하여 압력을 25~30cm 의 수로 조정할 수 있습니다. 펌프는 하부 및 상부 컨테이너를 연결하여 고정 표면 높이에서 25cm 차이를 유지하며 에이전트의 흐름을 지시합니다. 48시간 고정 후 주변 공기에 노출된 SMP30 녹아웃 마우스의 폐는 표시된 영공 확대를 나타내지 않는다.
그러나, 만성 담배 연기에 노출된 SMP30 녹아웃 마우스에서 상당한 영공 확대 및 폐포 벽 파괴가 관찰된다. 또한, 폐 시편의 평균 선형 요격 및 파괴 지수는 공기 노출 동물보다 SMP30 녹아웃 마우스가 노출된 연기에서 현저히 크다. 우리의 실험실은 10%의 포르말린을 사용하지만 연구원은 실험적인 필요에 따라 다른 고정 에이전트를 사용할 수 있습니다.
입증된 고정 시스템을 사용하여 보고된 바와 같이 폐 시료는 형태성 평가를 위해 다양한 마우스 폐기종 모델으로부터 수확될 수 있다. 고정 요원은 항상 적절한 인력 보호 장비를 착용하고 통풍이 잘되는 방에서 작동위험 할 수 있습니다.
