前体内基因治疗和自体细胞移植治疗肝脏的出生代谢错误是治疗这些疾病的重要替代方案。并且允许我们不仅治疗这些疾病，但找出必要的生物量，以便能够达到治疗效果。这种方法还避免了免疫抑制的严重后果和其他后果与不同类型的治疗。
在当前情况下，我们使用这种方法治疗遗传性酪氨酸血症类型1。然而，这个想法是，这将是一个平台方法，治疗许多不同的肝脏疾病，以最小的改变。能够可视化这种技术很重要，因为在可视化灌注效率方面存在一些变化，而灌注对于获得可行的肝细胞移植至关重要。
罗伯特·凯撒和约瑟夫·利勒加德的外科手术。杜泽吉，布鲁斯·阿米奥特进行细胞隔离。UAU细胞纯化和细胞的外体转导是由凯特琳·范利思完成的。
动物和 OR 的准备是由卡里艾伦和劳里希林完成的。要执行初始港口站点入口，请对一头麻醉、长达三个月的大型白色农场猪的脑毛病进行开放的哈森技术。将12毫米小车引入腹腔，腹腔可见。
当小车就位时，通过进入口的5毫米30度范围，用二氧化碳进入腹部，使15毫米汞。在腹腔镜相机的直接可视化下，在肝脏的左边叶上放置2个5毫米的端口，进行三角测量。将拉波器放在一个新的端口中。
在分离中叶和左横向的左叶主要裂缝点识别肝脏的左向段。并使用手术订书机固定血管结构和肝静脉沿这个裂缝。使用连续发射和 60、45 或 30 毫米长的血管载荷，通过此裂缝进行转行。
切除完成后，评估残肝，以确保足够的血液，并使用内窥镜抓握器和内窥镜组织检索袋来检索肝脏部分。现在，卸下端口，对中线筋膜使用中断尺寸零缝合线。深皮层的运行 2-0 缝合线。
和运行4-0缝合下切层，关闭12毫米端口切口在三个层。然后用2-0缝合线将五毫米端口合在一层。并在切口上放置无菌敷料。
对于肝细胞分离，首先连接一个近体泵组，以提供分散溶液，保持在43摄氏度的水浴，导管放置在肝脏部分的大，暴露的血管。用灌注两个溶液对泵和管进行注水，最多一个停止旋塞位置，在灌注一和灌注两个溶液之间切换至组织。将止回旋塞切换到灌注一个位置。
然后对管组的其余部分进行准备。完全填充内联气泡陷阱，以防止将气泡引入组织。接下来，做一个干净的横向切口，垂直于肝循环，以显示入口静脉分支的横截面和肝静脉的导管。
并使用舒适的导管导管导管导管可用的暴露静脉。当导管就位时，以每分钟 100 毫米的流速用热灌注一个溶液对被切除的肝脏组织进行灌注。每 30 到 60 秒将出口管从静脉移动到静脉。
并使用疏散管从组织托盘中取出多余的缓冲液。循环通过所有可用静脉 15 至 20 分钟后，在相同条件下切换到灌注两个溶液。使用回油泵将灌注两个溶液回收回储液罐，流速较慢，重新管理到组织中。
每五分钟检查一次气泡陷阱的表面温度，或检查肝脏，以确认肝细胞没有变冷。当肝脏在灌注约30分钟后发白时，将组织转移到无菌容器中，用无菌的dap包裹，将容器放入细胞培养罩中，以保持肝细胞处理期间的不育性。肝细胞和细胞分离的胶原酶分离需要完全完成，这样您就不要得到细胞的块状，这降低了细胞的生存能力和转导频率。
用肝细胞洗涤介质将肝脏淹没，并拖动剪刀穿过组织顶部，以破坏肝脏胶囊。戴上无菌手套，轻轻按摩肝脏，将肝细胞释放到介质中。并通过无菌纱布将组织上清液过滤成200毫升离心瓶。
通过离心收集过滤的肝细胞。将细胞集中到150毫升新鲜肝细胞洗涤介质中，放入一个200毫升的瓶子中，进行2次额外的洗涤。并在第三次离心后计算细胞。
然后，将细胞稀释至每毫升盐水浓度的1倍10至第九个肝细胞。对于分离的肝细胞的自动移植，使用2-5兆赫传感器通过超声波识别入口静脉，并引导一根5英寸，18规格的针头向主入口静脉，大约到其分叉。将细胞装入60毫升注射器，根据细胞总体积，将注射器附到针头上，注意不要冒泡。
接下来，用输液导管缓慢按下注射器柱塞，通过输液导管手动注入多达1倍至第九肝细胞，以监测移植期间的毛孔压力。当所有细胞都已交付后，取出导管并监测入口静脉是否存在血栓事件和超声波前流。在经过肝切除术的五头猪中，大多数的肝细胞产量超过10至第九个肝细胞，其生存能力约为80%。
为任何类型的所需操作（包括基因治疗）提供足够数量的细胞。这些准备的肝细胞的非移植部分的后续培养，在转导和初始电镀46小时后，表现出良好的生存能力和粘附性与典型的肝细胞形态。初始移植将因移植期间重新引入的细胞数量而异。
这些具有代表性的活检显示了基因校正细胞扩张的时间表。独特的疾病，如遗传性酪氨酸血症1型，享受积极选择压力的健康细胞。这种扩展通常在移植后12个月完成。
一旦移植的富马里亚切乙酸水解酶除壳动物在肝脏内纠正的肝细胞中实现了约20%的再种群，酪氨酸水平将与野生类动物相比正常化。与野生类动物相比，未经纠正的动物在碱性磷酸酶和阿斯巴酸转亚酶方面均表现出显著升高，但活体基因治疗使这些血清酶水平恢复正常。此外，一般肝脏代谢健康在未经治疗的淘汰猪中被破坏，如循环氨中的高程所示，这些高程在与经过治疗的肝细胞重新种群后得到纠正。
重要的是要记住，使用这种技术，以处理和操作组织仔细和尽可能少。增加组织处理或操作，导致细胞活力降低，产量降低。这种方法也适用于有兴趣研究弓分布和图形低效标记技术的人，使用病毒转导协议以外的其他技术。
不要忘记，使用病毒载体可能是危险的，因此在使用这些技术时，必须遵循适当的生物安全程序，以及佩戴个人防护设备。
