该协议首次描述了如何在心脏移植的大型动物模型中有效地将疗法施用于整个心脏同种异体移植物。该协议的主要优点是，它允许研究人员在移植后很长一段时间内测试治疗对整个心脏同种异体移植物的影响。该技术可用于研究预防心脏同种异体移植物排斥反应，原发性移植物功能障碍，最大限度地减少术后免疫抑制需求或延长心脏同种异体移植物寿命的干预措施。
优化暴露是移植过程中最具挑战性的部分，需要多个团队成员才能完成。同样，需要有经验的灌注师来协调和监测离体灌注。首先，根据猪的大小，使用从牛皮向下到剑齿的数字10刀片做一个20到30厘米长的切口。
使用电烙术将胸大肌从胸骨向下分开到剑突，小心地沿着胸骨的中线分开。一旦下降到胸骨，划中线，并通过用沉重的剪刀将其分开，从xiphoid开始胸骨切开术。然后在每次切口后延长胸骨切开术头颅。
使用手指扫除将心脏与胸骨钝分开，并通过丘脑完成胸骨切开术。使用胸骨牵开器优化手术场暴露后，通过从横膈膜纵向进入心包到主动脉并使用丝线创建心包支架，用电烙术识别和切除胸腺。将组织完全分开在主动脉和肺动脉之间，并可视化主动脉弓和头侧躯干的位置，以便于正确放置主动脉交叉钳。
使用剪刀和钝性解剖，环周释放上腔静脉，并在上腔静脉周围绑上两条零尺寸的丝线。将4-0号聚丙烯缝合线以U型缝合方式应用于上升主动脉，并以围网方式应用于右心房。插入由先前放置的U形缝线固定的小儿主动脉根套管。
然后在将套管脱气后，用拉梅尔止血带固定到位。在主动脉根管被 del Nido 心脏麻痹冲洗后，将主动脉根插管连接到心脏麻痹管。在先前放置的钱包内创建右心房切开术。
将静脉插管插入右心房，并用拉梅尔止血带固定。将静脉插管连接到连接到细胞储蓄器心脏切开术的无菌吸入管路，并收集约1至1.3升血液。然后应用主动脉交叉夹，小心地确保夹子完全遮挡上升的主动脉。
在心脏上放置无菌冰泥后，将下腔静脉和上腔静脉分开，正好位于合子静脉的近端。弓水平端的主动脉刚好远端于无名动脉，主肺动脉位于分叉处。识别并连接肺静脉，然后从胸部取出心脏并将其放入装有无菌冰的容器中。
为了准备主动脉以放置主动脉连接器，将四条承诺的4-0号聚丙烯缝合线以简单的水平床垫方式放置在远端主动脉内侧周围，在切割边缘以下五毫米处，然后将其绑住。在举起承诺的主动脉缝合线时，将主动脉连接器插入主动脉，并在主动脉周围系上脐带以固定连接器。在主肺动脉的远端切口边缘周围放置一根 4-0 号聚丙烯钱包。
插入肺动脉插管并系上钱包的两端以固定套管。然后将肺动脉插管连接到设备上的肺动脉连接器，并用领带固定。将准备好的移植物从后台带到离体灌注装置，并将主动脉连接器连接到装置位置。
左心室通气通过未系带的肺静脉流入左心房，穿过二尖瓣进入左心室。使用数字10刀片，做一个20至30厘米长的皮肤切口，然后使用电烙术继续解剖到筋膜。用两个Kocher钳抬起筋膜和腹膜后，使用Metzenbaum剪刀小心地在腹膜腔中做一个小切口。
使用电烙术将腹膜开口延长至切口的整个长度。将手指放在下面以保护下面的内脏。放置 Balfour 牵开器以优化暴露，并使用湿毛巾颅内缩回小肠。
将夹层向下带到下腔静脉的腹主动脉，然后用中大夹子连接淋巴管。在后台上，当左心室室通口插入的肺静脉左心房切开术被过度播种时，修剪主动脉和肺动脉的远端，其中连接到套管可能已经压碎了组织。将Satinsky夹在下腔静脉上，并使用数字11刀片和Pott剪刀创建约1.5厘米的纵向静脉切开术。
使用运行尺寸为 4-0 的聚丙烯缝合线，以端对侧的方式将肺动脉移植物吻合到受者的肾下下腔静脉。然后使用运行尺寸为4-0的聚丙烯缝合线以末端到侧面的方式将主动脉移植物吻合到受体的肾下主动脉。小心地将心脏置于右侧腹膜后间隙，防止吻合口紧张和血管扭结。
然后更换小肠。用环大小为零的Maxon缝合线以跑步方式关闭筋膜，从切口的两端开始，并在中间绑扎，避免对肠道造成任何伤害。以跑步方式关闭尺寸为2-0 Vicryl的真皮深层层，以跑步方式关闭尺寸为4-0单烯的真皮深层。
获得了几种不同的灌注参数。从肺动脉、主动脉和冠状动脉测量循环流速。还测量了主动脉压力，包括平均压力，收缩压，舒张压。
在离体灌注期间，还测量了心脏同种异体移植物的心率和温度。在灌注期间，从灌注液中测量混合静脉血氧饱和度和血细胞比容值。腹腔内异位心脏原位35天的存活率表明使用该方案移植成功。
要记住的最重要的事情是为同种异体移植物选择一个位点，以最大限度地减少吻合口紧张和扭结的可能性。通过遵循这一程序，研究人员将能够测试几种不同类型的治疗方法，以确定它们对同种异体移植物的免疫反应的影响，并确定治疗作用对同种异体移植物的寿命。在开发该协议后，我们小组已经能够测试用于基因递送的不同病毒载体载体，以及急性同位异体排斥的模型，以了解排斥的病理生理学和使用病毒载体的基因递送的功效。
