肠道血屏障是一个多层系统,控制营养物质、细菌代谢物、药物和其他外源化合物从肠道流明进入血液的通道。正如我们所了解的,屏障的完整性可能在胃肠道以及心血管和一些代谢疾病中受到损害,这可能导致生物活性化合物(如肠道细菌代谢物)更容易进入血液,并可能影响整个生物体的功能。因此,肠道血屏障的渗透性可能是肠道和肠道疾病的标记。
在这段视频中,我们直接测量了大鼠在将测试物质给消化道后使用门户血液采样的肠道血液屏障渗透率。我们详细描述了入口静脉和劣质静脉的分类,就在肝静脉汇合的上方。从入口静脉和劣质静脉的血液采样不仅能够评估肠道血液屏障的渗透性,还可以评估肠道细菌代谢物或药物等有关分子的肝清除和吸收途径。
这种方法几乎不受肝肾功能的影响,并保留了肠道血流量,这是一个强大的优势,在体内和体外常用的方法。动物应在手术前通宵禁食。在全身麻醉期间执行所有程序。
实验后动物被安乐死。我们的程序从插入行开始,用于训练线管理。在这里,我们建议在分色中管理标记。
它也许被各级消化道的行政部门修改。例如,胃或十二指肠。然而,在将标记法管理到胃肠道上部时,考虑到近呼吸道的可变速度和可能与酶和胃酸的相互作用。
使用小儿Foley导管大小10F或8F作为结肠导管。标记导管以指示将插入结肠的零件大约 8 厘米。在将导管插入结肠之前,检查肛门区域和直肠中粪便的计数。
如果凳子存在,通过按摩直肠区域来清空直肠。沿导管放润滑剂。接下来,用润滑剂润湿了阿努斯及其周围环境。
将导管用导管穿过外部肛门括约肌。进行缓慢的前进、后退和循环运动。在插入导管时,通过腹部眼皮继续检查导管的位置。
下一步是劣质的维纳卡瓦导管。您可以在肠道渗透性研究中跳过此过程。尝试感受股动脉上的脉搏,在脉搏明显的地方纵向切割皮肤约两厘米。
解剖筋膜和肌肉,以可视化神经血管束。接下来,从神经血管束解剖股骨静脉。先是神经,然后是股动脉,然后是静脉。
在解剖包时要小心,因为股骨静脉的几个小分支很容易损坏。接下来在股骨静脉上放两个连字。还不要打结。
用针架抓住近线连结的末端。然后小心地将连结末端与支架向上拉,以关闭静脉的近端部分。等到静脉里满是血,绑住大肠结。
接下来,使用显微手术剪刀在结和近结字之间的静脉上做一个小切口。然后插入导管使用钳子或针与弯曲的端,因为我们在视频中做。刺穿静脉,使用针头的弯曲尖端作为导管的导轨。
插入导管时松开近向连结。插入导管约六至七厘米,具体取决于动物的大小,将导管的近端放在肝静脉汇合上方的劣质静脉中。实验后应确认导管的正确位置。
用两个单手术结将导管固定在股骨静脉中。也系上近线连字。试图通过注射器抽血检查导管的附度。
用 0.3 毫升的肝素盐水冲洗导管。用两层单针关闭手术伤口。现在,我们进入门户静脉导管。
准备门户导管。它由针头、柔性聚氨酯导管、柔性聚乙烯导管尖端、插头和连结体组成。手术的第一步是进行中线腹腔切除术。
准备操作场后,将皮肤从胸骨的西腓纵向切到肚脐。沿着白线切割腹壁的肌肉。接下来,在 y 形状中展开切口,使西腓软骨介于两个切口之间。
下一步是门户静脉解剖。首先,用盐水润湿拭子。然后外化 cecum、 升序和横向结肠, 和小肠循环.
把肠子放在左边,露出肠子的根部。用湿润的纱布覆盖肠道,防止它们干燥。使入口静脉小心地将肝叶移动到两侧或向上,用湿润的拭子朝隔膜移动。
在这里,我们可以看到门户静脉和上肠静脉。本地化门户静脉中未覆盖的一部分,并在门户静脉下传递连字。为了保护组织免受损伤,请用生理盐水溶液润湿连结。
用钳子将连结的末端夹住,轻轻拧紧以稳定容器。将导管连结的较长部分穿过入口静脉的自由部分,然后拉扯,使导管位于入口静脉旁边。将针头插入上肠静脉,在上肠静脉和门户静脉交界处以下三毫米。
以 30 度角握住针头,进入静脉后,减小角度,将针头几乎水平地与入口静脉平行推进,长度约为 6 至 7 毫米。在插入针头的地方涂抹一两滴组织胶水。取出覆盖肝脏的棉签。
之后把肠子放回腹腔。用加热的盐水溶液滋润肠道,用湿润的无菌纱布盖住。检查导管的附度,并用肝素盐水冲洗导管。
静脉血自发地回流到导管中。五分钟后检查肠道的颜色和围体运动,以确保适当的肠血流保持。最后,用三层缝线关闭腹腔,将导管的外侧部分外化肚脐周围。
要从入口静脉收集血液,请打开入口导管塞,让血液自由流动。使用注射器和钝针,收集不超过0.7毫升的血液。用肝素盐水冲洗导管,然后关闭导管塞。
在这里,我们提出了示范性门户血液采样方案,用于肠道渗透性评估。来自劣质维纳卡瓦的血液样本是肝清除和吸收研究所必需的。从劣质的静脉中采集血液,与从入口静脉取血时完全一样进行。
在这里,我们提出了一个示范性的血液采样方案,用于肝脏清除测量和跟踪选定化合物的肠道-门户血液-肝脏-系统血液通路。在我们的研究中,我们使用细菌代谢物,三乙胺作为渗透性的标志。然而,许多其他物质,包括类渗透标记也可以使用。
各种细菌和代谢物和肠道也可用于治疗吸收途径或肝间隙。拆下导线,使用足够体积的无菌水充气气球,通常为一毫升,但在插入前检查气球的大小。气球直径不应超过一厘米。
将大鼠头向下放置,以尽量减少从结肠流出的施用溶液的风险。使用排水口和结肠导管慢慢管理测试物质。我们使用三甲胺的剂量为每公斤100毫克,体重溶解在0.7毫升盐水中。
十分钟后,将导管气球放气。肝间隙理解为肝萃取,可由门户血液浓度和劣质维纳卡瓦血浓度的差异或低劣的维纳卡瓦和门户血液浓度的比例来表示。我们成功地测量了大鼠三甲胺的肠血屏障渗透性和肝清除性。
以下是与高血压大鼠相比,高血压大鼠对TMA的结肠渗透性有所提高的代表性结果。在另一项研究中,我们研究了高盐摄入量是否影响三乙胺的肠道血屏障渗透性和肝脏清除性。三甲胺的分气内注射导致门户血液TMA浓度显著增加。
增加和肝间隙的大小在各组之间相似。我们还跟踪了短链脂肪酸的吸收途径。我们测量了粪便、门户血和外周血的浓度。
在这段视频中,我们描述了一个全面的方案,包括直接测量体内的肠血屏障渗透性,与常用方法相比,它不受肝脏和肾脏功能的影响,肝间隙测量,第三,评价外源化合物的吸收途径。提出的技术可以调整到其他实验目的。例如,门户血压测量或药物给药直接到门户静脉。