腸管バリアは、栄養素、細菌代謝産物、薬物、および腸内腔から血流への他の外因性化合物の通過を制御する多層系である。私たちが知っているように、バリアの完全性は、胃腸だけでなく、心血管疾患およびいくつかの代謝性疾患において損なわれる可能性があり、腸内細菌代謝産物などの生物学的に活性な化合物の血流へのアクセスが容易になり、生物全体の機能に影響を与える可能性があります。したがって、腸管-血液バリアの透過性は、腸および腸外疾患の両方のマーカーであり得る。
このビデオでは、消化管への試験物質の投与後に門脈血液サンプリングを用いたラットにおける腸血関透過性の直接測定を行う。我々は、肝静脈合流のすぐ上の門脈および下静脈の分類を詳細に記述する。門脈や下静脈から採取した血液は、腸管と血液のバリア透過性だけでなく、腸内細菌の代謝物や医薬品などの目的の分子の肝クリアランスと吸収経路を評価することを可能にする。
この方法は、肝臓および腎臓機能の影響を事実上受け入れ、生体内およびインビトロ法で一般的に使用されるよりも強い利点である腸血流を保存します。動物は、手順の前に一晩断食する必要があります。全身麻酔中に全ての処置を行う。
動物は実験後に安楽死させられます。我々の手順は、腸内投与のためのラインの挿入から始まります。ここでは、マーカーのコロン内投与を提案する。
それは多分消化管の様々なレベルでの投与によって変更されます。.例えば、胃や十二指腸。しかし、胃腸管の上部にマーカーを投与しながら、蠕動の可変速度と酵素および胃酸との可能な相互作用を考慮に入れます。
小児フォーリーカテーテルサイズ10 Fまたは8Fを大腸カテーテルとして使用してください。カテーテルをマークして、約8センチメートルの結腸に挿入される部分を示します。結腸にカテーテルを挿入する前に、直腸の肛門領域と便の数を確認してください。
便が存在する場合は、直腸領域をマッサージして直腸を空にする。カテーテルに沿って潤滑剤を入れます。次に、潤滑剤でアヌスとその周辺を湿らせ。
外付け肛門括約筋を通してガイドワイヤーでカテーテルを挿入します。ゆっくりと前進、後方、および円形の動きを行います。カテーテルを挿入しながら、腹部触診によってカテーテルの位置を確認し続けます。
次のステップは、下の大静脈カテーテル法である。腸透過性研究でこの手順をスキップすることができます。.大腿動脈の脈拍を感じ、脈拍が触知可能な場所で約2センチメートルの長さで皮膚を縦方向に切断するようにしてください。
筋膜と筋肉を解剖して神経血管束を可視化する。次に、神経血管束から大腿静脈を解剖する。最初の神経、次に大腿動脈、次に静脈。
大腿静脈のいくつかの小さな枝が損傷しやすいので、バンドルの解剖中に注意してください。次に、大腿静脈に2つの合字を置きます。結び目はまだ結びないでください。
針ホルダーで近位合字の両端をキャッチします。その後、慎重にホルダーで合字の端を上に引っ張り、静脈の近位部分を閉じます。静脈が血液で満たされるまで待ち、遠位結び目を結びます。
次に、微小手術用ハサミを用いて結び目と近位合字の間の静脈に小さな切開を行う。次に、ビデオのようにピンセットまたは湾曲した端を持つ針を使用してカテーテルを挿入します。静脈を穿刺し、カテーテルのガイドとして針の曲がった先端を使用します。
カテーテルを挿入しながら、近位合字を緩めます。動物の大きさに応じて約6〜7センチメートルのカテーテルを挿入し、肝静脈合流のすぐ上の下の大静脈にカテーテルの近位先端を配置します。カテーテルの適切な配置は、実験後に確認する必要があります。
2つの単一の外科結び目で大腿静脈のカテーテルを固定する。近位合字も結びます。注射器で血液を引き出してカテーテルのステイシーを確認してください。
ヘパリン化生理食塩水の0.3ミリリットルでカテーテルをすすいすいます。単一のステッチの2つの層で外科的創傷を閉じます。今、私たちは、ポータル静脈カテーテル法に進みます.
ポータルカテーテルを準備します。それは針、適用範囲の広いポリウレタンカテーテル、カテーテルの柔軟なポリエチレン先端、プラグ、および合字から成っている。手順の最初のステップは、正中腹腔内術を行う。
手術場を準備した後、胸骨のxiphoidから臍に縦方向に皮膚を切断する。白い線に沿って腹壁の筋肉を切ります。次に、xiphoid軟骨が2つのカットの間になるように、y形でカットをロストラリーに拡大します。
次のステップは、ポータル静脈解剖です。まず、生理した綿棒を湿らせ。そして、セカム、昇順と横結腸、および小腸ループを外装する。
腸を左側に置き、腸間腸の根を露出させます。乾燥からそれらを保護するために生理食塩水で湿らせたガーゼで腸を覆います。ポータルの静脈を露出させるために、肝ローブを慎重に側面に移動するか、湿らせた綿棒で横隔膜に向かって上向きに動かす。
ここでは、ポータル静脈と上部腸間膜静脈を見ることができます。腸間腸で覆われないポータル静脈の部分を局所化し、ポータル静脈の下で合字を渡します。組織を損傷から守るために、生理的生理食塩水で合字を湿らせます。
合字の端部を鉗子でクランプし、容器を安定させるために穏やかに締めます。カテーテルの合字の長い部分をポータル静脈の自由な部分の下に渡し、カテーテルがポータル静脈のすぐ隣に位置するように引っ張ります。上部腸間膜静脈と門脈の接合部の3ミリメートル下の上部腸間膜静脈に針を挿入します。
針を30度の角度で保持し、静脈に入った後、角度を下げ、約6〜7ミリメートルの長さで門脈に平行に針をほぼ水平に進めます。針が挿入された場所にティッシュ接着剤を1〜2滴塗布します。肝臓を覆う綿棒を取り除く。
その後、腸を腹腔に戻します。温めた生理液で腸を湿らせ、湿潤した滅菌ガーゼで覆います。カテーテルのステイシーを確認し、ヘパリン化された生理食前でカテーテルをすすいします。
静脈血はカテーテル内で自発的に逆流する。5分後に腸の色と蠕動運動をチェックし、適切な腸間膜血流が維持されていることを確認します。最後に、臍の周りのカテーテルの遠位部分を外側にするステッチの3つの層で腹腔を閉じます。
門脈から血液を採取するには、門脈プラグを開き、血液を自由に流します。注射器と鈍い針を使用し、血液の0.7ミリリットル以下を収集します。カテーテルをヘパリン化した生理食前でリンスし、カテーテルプラグを閉じます。
ここでは、腸透過性評価のための模範的な門脈血液サンプリングプロトコルを提示する。下の静脈からの血液サンプルは、肝クリアランスおよび吸収研究に必要である。下の静脈から血液を採取するには、門脈から血液を採取するときとまったく同じように進みます。
ここでは、肝臓クリアランス測定と選択した化合物の腸門-門脈血液-肝臓全身血液経路を追跡するための例示的な血液サンプリングプロトコルを提示する。我々の研究では、透過性のマーカーとして細菌代謝産物、トリメチルアミンを使用しました。しかし、クラス透気マーカーを含む他の多くの物質も同様に使用され得る。
種々の細菌および代謝物および区域はまた、吸収経路または肝クリアランスをトラクトするために使用され得る。ガイドワイヤーを取り外し、通常1ミリリットルの無菌水の十分な量を使用してバルーンを膨らませるが、実際に挿入前にバルーンサイズを確認してください。バルーンの直径は1センチメートルを超えてはなりません。
ラットヘッドを下に置き、投与した溶液が結腸から流出するリスクを最小限に抑えます。排水路および大腸カテーテルを使用して試験物質をゆっくりと投与する。我々は、生理食塩水の0.7ミリリットルに溶解した体重1キログラム当たり100ミリグラムの用量でトリメチルアミンを使用しました。
10分後にカテーテル風船を膨らむ。肝抽出として理解される肝クリアランスは、門脈血中濃度と下大静脈血中濃度の差、または下の大静脈および門脈血中濃度の比によって表され得る。ラットのトリメチルアミンの腸血関門透過性と肝臓クリアランスの測定に成功しました。
高血圧ラットが、ノルモテンスラットと比較してTMAへの結腸透過性を増加したことを示す代表的な結果を以下に示す。別の研究では、高塩分摂取量がトリメチルアミンの腸血関門透過性と肝臓クリアランスに影響を与えるかどうかを研究しました。トリメチルアミンのイントリンコニック投与は、門脈血TMA濃度の有意な増加を生じ.
増加および肝クリアランスの大きさは、群間で類似していた。また、短鎖脂肪酸の吸収経路も追跡しました。便、門脈血液、末梢血中の濃度を測定した。
本ビデオでは、一般的に使用される方法とは対照的に、肝臓および腎臓機能、肝クリアランス測定、および第3に外因性化合物の吸収経路の評価によって影響を受けない生体内の腸血関透過性の直接測定を含む包括的なプロトコルを説明した。提示された技術は、他の実験目的に調整されてもよい。例えば、門脈の血圧測定または薬物投与は直接門脈にする。
