人肺组织中ZW10相互作用蛋白免疫染色的数字化分析

该方法有助于回答病理和免疫组织化学中的关键问题。该技术的主要优点是速度更快，并且能产生高质量的数字媒体。首先在室温下将三到三厘米的贡组织样本固定在4%的甲醛中24小时。

第二天，在室温下脱水乙醇浸入乙醇，然后三次浸入100%二甲苯，每次治疗20分钟。最后一次二甲苯浸入后，将组织放在63摄氏度的石蜡中30分钟，然后再将45分钟浸入63摄氏度的新鲜石蜡中，然后再更换石蜡，进行最后一小时的孵化。当石蜡冷却后，使用旋转微原子获取石蜡嵌入组织样品的五微米厚部分，在 20 微克/毫升聚L-莱辛涂层的幻灯片上捕获部分。

对于脱华，将幻灯片放入65摄氏度的烤箱中两小时，然后浸入二甲基苯15分钟，在100%二甲苯中浸泡15分钟，然后以降乙醇浸入系列重新浸渍幻灯片。对于抗原修复，将幻灯片放在抗原修复箱中，并在盒中加入 300 毫升柠檬酸修复液。在高功率的微波炉中加热盒子两分钟，然后以低功率加热，保持沸腾六分钟。

当幻灯片冷却到室温时，用三个五分钟0.01摩尔PBS在室温下用旋转摇床清洗组织样品。为了消除内源性过氧化物酶，在室温下在湿箱中用3%过氧化氢在湿盒中孵育30分钟。在孵化结束时，如所证明的清洗幻灯片，并插入每个部分的任何非特异性结合与100微升10%山羊血清在37摄氏度下39分钟。

接下来，在4摄氏度的一夜之间，每幻灯片用100微升的抗ZWINT抗体标记组织，然后用0.01摩尔PBS进行三次洗涤。最后一次洗涤后，在37摄氏度下用适当的二次抗体孵育幻灯片30分钟，然后洗三次0.01摩尔PBS。上次洗涤后，将幻灯片加入 300 微升新鲜 DAB 10 分钟，然后用自来水在室温下洗 10 秒。

计数器用赤氧林染色溶液在室温下染色组织两分钟，然后在自来水中清洗15分钟，然后在上升乙醇浸入中再次脱水组织，然后在室温下两次15分钟浸入二甲苯中。最后100%乙醇浸入后，在中性胶溶液中用15微升5%二甲苯将部分安装，并用盖玻璃覆盖每个组织样品。对于部分的自动全滑动扫描，首先允许幻灯片在室温下干燥 12 小时，以干燥组织样本。

接下来，在自动全滑动扫描仪中，手动选择 Brightfield 并输入手动扫描界面。修改幻灯片的名称，并选择图像的存储路径。设置扫描区域，并使用"用户设置阈值"选项选择扫描示例。

阈值约为 50，扫描面积扩展值为 200 微米。设置扫描焦点值并选择"自动对焦和单层模式"，然后将幻灯片加载到工作站并开始自动扫描。扫描所有幻灯片后，请保存图像以进行以后分析。

要分析肺组织部分的图像，请打开组织病理学图像分析软件，然后选择本地计算机，使用扫描数据打开文件。选择适当的缩放级别，并使用"切换颜色调整"将颜色设置为最佳对比度，然后在每个图像上圈出并命名感兴趣的区域。接下来，在插件下，选择质量控制。方案生成器将弹出。

选择密度量分并调整检测栏。调整分数级别，直到圆形区域的染色强度与原始图像的染色强度相似，并存储模型并将其命名为新文件，然后将模型应用于其他幻灯片并选择"选择注释"，让软件自动计算每个图像中感兴趣区域的 APE 分数。从非小细胞肺癌标本中对肿瘤的肺组织部分和相邻的非肿瘤组织进行全滑动数字扫描，生成高质量的数字图像。

从这些类型的肺癌样本计算的 APE 分数通常明显高于为相邻非癌症组织确定的 APE 分数。此外，鳞状细胞癌组织部分的ZWINT表达水平经常被确定明显高于在abno癌组织样本中测量的水平。在尝试此程序时，在进行病理扫描时，必须记住要准备高质量的肿瘤或肿瘤区域。

按照此过程，可以执行显微镜的其他方法，以回答其他问题。病理扫描的方法既不是或不同的方法。在这项技术为病理扫描领域的研究人员探索研究目的的数字诊断铺平了道路。

不要忘记，使用甲状甲醛可能非常危险，执行此过程时应始终采取口罩等预防措施。