在这段视频中,我们介绍了如何使用气缸和开放场测试来缩小帕金森病MPTP模型中的电机功能。主要优点是,在行为测试之前,不需要训练老鼠。此外,该方法效率高,设备成本低。
对行为测试的新鲜人可能低估了环境干扰的影响。保持安静和避免衬里的变化会有所帮助。在这里,行为测试进行24小时后,最后注射7天的MPTP方案或盐水注射和40分钟后,胃内给发L-DOPA的一部分动物。
如果不在动物居住的同一房间进行行为测试,请让小鼠在测试前 30 到 60 分钟适应新房间。首先将透明玻璃缸放在桌子的中心。用黑色纸板将气缸的三面环绕,放置在离气缸四到八厘米远的地方,以减少环境照明的影响。
让气缸的一侧朝向摄像机进行录像。连接距离气缸至少 100 万像素分辨率 40 至 60 厘米的摄像机,以确保整个圆柱体包含在视野中。一次将一只鼠标放入圆柱体中,然后立即开始拍摄。
在这个过程中,尽量避免噪音或光线变化,以避免影响鼠标的行为。当鼠标在后肢上抬起后肢时, 爪子升降机会发生, 同时将前肢抬高到肩部以上, 然后降落。三分钟后停止拍摄,把鼠标放回家里的笼子里。
用水清洁圆柱体,然后在内壁上喷洒70%的种族,以消毒并去除老鼠的气味。在测试下一个鼠标之前,请擦干气缸。测试完成后,以正常速度的 0.5 倍的速度播放视频,并计算每只鼠标墙上的爪子升降机数量。
如果鼠标连续几次在肩部以上提升前肢而不着陆,则只计算一次。在与气缸测试相同的会话期间执行开放场测试。准备一个透明的开放式现场反应箱与木板,覆盖对比黑色或白色布,这取决于鼠标的颜色。
将摄像机固定到一米高的场地上。调整摄像机以确保打开的场反应框位于视频的中心。将一只测试鼠标放入框中,让鼠标熟悉环境约一分钟。
使用连接到计算机的摄像机录制五分钟的视频。最后,清理露天反应箱中的任何粪便,在箱体上喷洒70%乙醇,然后擦拭。在气缸测试中,与盐水处理的小鼠相比,使用MPTP治疗的小鼠的后壁数量减少。
与接受盐水的MPTP治疗小鼠相比,在测试当天给予L-多巴胺的MTPT治疗小鼠中观察到后方增加。此图像显示了未使用 MPTP 治疗的对照小鼠中的代表性运动轨迹和静态时间、行走时间和运行时间分布情况。使用MTPT治疗的小鼠运动速度较低,运动距离更短,静态时间更长,运行时间更短,然后盐水治疗小鼠,表明MTPT引起的运动缺陷。
MPTP治疗的小鼠接受L-多巴胺显示,与仅接受MPTP治疗的小鼠,运动速度更高,运动距离更长,静态时间更短,运行时间更长,这表明L-多巴胺缓解了MPTP引起的运动缺陷。当改变被测试的小鼠时,完全清除区域并喷洒乙醇,以消除前小鼠气味的影响。按照此程序,还可以执行其他措施,如光束行走测试、杆子测试。
通过这些方法可以获得与平衡能力和运动能力相关的数据。MPTP对小鼠和人类都是神经毒性,因此必须采取严格的预防措施以避免接触。应佩戴额外的 PPE,如面罩或呼吸器。