Bu videoda, Parkinson hastalığının MPTP modelinde motor fonksiyonunu daraltmak için silindir ve açık alan testinin nasıl kullanılacağını tanıtıyoruz. Birincil avantajı fareler davranış testi önce eğitilmiş olması gerekmez. Ayrıca, bu yöntem verimli ve ekipman maliyeti düşüktür.
Davranışsal testlerde yeni olan bireyler çevresel müdahalenin etkisini hafife alabilir. Sessiz kalmak ve astar değişiklikleri önlemek yardımcı olacaktır. Burada, davranışsal testler MPTP veya tuzlu enjeksiyonyedi günlük rejimin son enjeksiyondan 24 saat sonra ve hayvanların bir alt kümesine L-DOPA intragastrik uygulamadan 40 dakika sonra yapılır.
Hayvanların barındığı aynı odada davranışsal testler yapılmazsa, fareleri testten 30 ila 60 dakika önce yeni odaya alıştırın. Bir tablonun ortasına şeffaf bir cam silindir yerleştirerek başlayın. Siyah karton ile üç tarafta silindir surround, çevresel aydınlatma etkisini azaltmak için silindir den dört ila sekiz santimetre uzağa yerleştirilir.
Video kaydı için silindirin bir tarafını kameraya bakacak şekilde bırakın. Silindirden 40 ila 60 santimetre uzağa en az bir milyon piksel çözünürlüğe sahip bir kamera takın ve tüm silindirin görüş alanında olduğundan emin olun. Bir seferde silindiriçine bir fare yerleştirin ve hemen filme başlar.
Bu işlem sırasında farenin davranışını etkilememek için gürültü veya ışık değişikliklerinden kaçınmaya çalışın. Pati asansörleri, farearka ekstremitelerinin üzerine çıktığında, her iki ön uzuvları omuz seviyesinden yukarı kaldırdığında ve yere indiğinde meydana gelir. Üç dakika sonra çekimi durdurun ve fareyi ev kafesine geri yerleştirin.
Silindiri suyla temizleyin ve sonra temizlemek ve fare kokularını kaldırmak için iç duvarın üzerine %70 etnol püskürtün. Bir sonraki fareyi test etmeden önce silindiri kurutun. Test tamamlandıktan sonra, videoyu normal hızın 0,5 katı hızda oynatın ve her farenin duvarına karşı pati asansörlerinin sayısını sayın.
Fare iniş yapmadan iki kez omuz hizasının üzerine çıkarsa, yalnızca bir kez sayılmalıdır. Silindir testi ile aynı oturum sırasında açık alan testi gerçekleştirin. Farenin rengine bağlı olarak zıt siyah veya beyaz bir bezle kaplı ahşap bir plakalı şeffaf bir açık alan reaksiyon kutusu hazırlayın.
Bir metre yükseklikte alan üzerinde bir kamera sabit. Açık alan reaksiyon kutusunun videonun tam ortasında olduğundan emin olmak için kamerayı ayarlayın. Kutunun içine bir test faresi koyun ve farenin çevreye yaklaşık bir dakika boyunca alışmasına izin verin.
Bilgisayara bağlı kamerayı kullanarak beş dakikalık bir video kaydedin. Son olarak, açık alan reaksiyon kutusundaherhangi bir dışkı temizlemek, sprey% 70 etanol kutusuna, ve silin. Silindir testinde, mptp ile tedavi edilen farelerde, tuzlu tedavi edilen farelere göre duvara karşı arka sayısının azaldığı gözlenmiştir.
Test günü L-Dopamin verilen MTPT tedavi edilen farelerde, tuzlu su alan MPTP tedavi edilen farelere göre artış gözlenmiştir. Bu resim, temsili hareket izleme ve statik zaman dağılımı, yürüme süresi ve mptp ile tedavi edilmeyen kontrol farelerde çalışma süresi gösterir. MTPT ile tedavi edilen fareler, daha düşük hareket hızı, daha kısa hareket mesafesi, daha uzun statik süre ve daha kısa çalışma süresi gösterdikten sonra tuzlu fareleri tedavi etti ve MTPT tarafından indüklenen bir motor açığı gösterdi.
MpTP tedavi fareler L-Dopamin alan daha yüksek bir hareket hızı gösterdi, daha uzun bir hareket mesafesi, daha kısa bir statik süre, ve fareler sadece MPTP ile tedavi daha uzun bir çalışma süresi, L-Dopamin MPTP kaynaklı motor açığı nı azaltır belirten. Test edilen fareler değiştirirken alanı tamamen temizleyin ve eski farelerin kokusunun etkisini ortadan kaldırmak için etanol püskürtün. Bu işlemden sonra ışın yürüyüş testi, kutup testi gibi diğer önlemler de yapılabilir.
Bu yöntemlerle denge kapasitesi ve motor yeteneği ile ilgili veriler elde edilebilir. MPTP hem fareler hem de insanlar için nörotoksiktir ve bu nedenle maruz kalmamak için sıkı önlemler alınmalıdır. Maske veya solunum cihazı gibi ekstra PPE takılmalıdır.
