In questo video, introduciamo come utilizzare un cilindro e un test a campo aperto per restringere la funzione motoria nel modello MPTP del morbo di Parkinson. Il vantaggio principale è che i topi non hanno bisogno di essere addestrati prima del test comportamentale. Inoltre, questo metodo è efficiente e il costo dell'apparecchiatura è basso.
Gli individui che sono nuovi ai test comportamentali possono sottovalutare l'effetto delle interferenze ambientali. Stare zitti ed evitare cambiamenti nel rivestimento aiuterà. Qui, i test comportamentali vengono condotti 24 ore dopo l'iniezione finale di un regime di sette giorni di iniezioni MPTP o saline e 40 minuti dopo la somministrazione intragastrica di L-DOPA a un sottoinsieme degli animali.
Se i test comportamentali non vengono eseguiti nella stessa stanza in cui sono alloggiati gli animali, acclimatare i topi nella nuova stanza per 30-60 minuti prima del test. Iniziare posizionando un cilindro di vetro trasparente al centro di un tavolo. Circondare il cilindro su tre lati con cartone nero, posizionato da quattro a otto centimetri di distanza dal cilindro per ridurre l'effetto dell'illuminazione ambientale.
Lasciare un lato del cilindro rivolto verso la fotocamera per la registrazione video. Fissare una fotocamera in grado di raggiungere una risoluzione di almeno un milione di pixel da 40 a 60 centimetri dal cilindro per assicurarsi che l'intero cilindro sia contenuto nel campo visivo. Posizionare un mouse nel cilindro alla volta e iniziare a filmare contemporaneamente.
Durante questo processo cercare di evitare rumori o cambiamenti di luce per evitare di influenzare il comportamento del mouse. Gli ascensori delle zampe si verificano quando il mouse si solleva sugli arti posteriori, solleva entrambi gli arti anteriori sopra il livello della spalla e atterra. Interrompere le riprese dopo tre minuti e riposizionare il mouse nella gabbia di casa.
Pulire il cilindro con acqua e quindi spruzzare il 70% di etnolo sulla parete interna per sanizzarlo e rimuovere i profumi del topo. Asciugare il cilindro prima di testare il mouse successivo. Una volta completato il test, riproduci il video a una velocità di 0,5 volte la velocità normale e conta il numero di sollevamento delle zampe contro la parete di ogni mouse.
Se il mouse alza gli arti anteriori sopra il livello della spalla più volte continuamente senza atterrare, dovrebbe essere conteggiato una sola volta. Eseguire test sul campo aperto durante la stessa sessione del test del cilindro. Preparare una scatola di reazione trasparente a campo aperto con una piastra di legno, coperta da un panno nero o bianco a contrasto a seconda del colore del mouse.
Fissare una fotocamera sul campo ad un'altezza di un metro. Regolare la fotocamera per assicurarsi che la casella di reazione a campo aperto si trova proprio al centro del video. Metti un mouse di prova nella scatola e lascia che il mouse familiarizzi con l'ambiente per circa un minuto.
Registrare un video di cinque minuti utilizzando la fotocamera collegata al computer. Infine, pulire eventuali feci nella scatola di reazione a campo aperto, spruzzare il 70% di etanolo sulla scatola e pulirlo. Nel test del cilindro, è stata osservata una diminuzione del numero di posteriori contro la parete nei topi trattati con MPTP rispetto ai topi trattati con soluzione salina.
L'aumento delle spalle è stato osservato nei topi trattati con MTPT dato L-Dopamina il giorno del test rispetto ai topi trattati con MPTP che ricevono soluzione salina. Questa immagine mostra la traccia di movimento rappresentativa e la distribuzione del tempo statico, del tempo di perezione e del tempo di esecuzione nei mouse di controllo non trattati con MPTP. I topi trattati con MTPT hanno dimostrato una minore velocità di movimento, una distanza di movimento più breve, un tempo statico più lungo e tempi di corsa più brevi rispetto ai topi trattati con soluzione salina, dimostrando un deficit motorio indotto dall'MTPT.
I topi trattati con MPTP che ricevevano L-Dopamina mostravano una maggiore velocità di movimento, una distanza di movimento più lunga, un tempo statico più breve e un tempo di esecuzione più lungo rispetto ai topi trattati con solo MPTP, indicando che L-Dopamina mitiga il deficit motorio indotto dall'MPTP. Quando si cambiano i topi testati cancellare completamente l'area e spruzzare etanolo per eliminare l'effetto del profumo degli ex topi. Seguendo questa procedura, è possibile eseguire altre misure come il test di camminata del fascio, il test del palo.
I dati relativi alla capacità di bilanciamento e alla capacità motoria possono essere ottenuti attraverso questi metodi. L'MPTP è neurotossico sia per i topi che per l'uomo e quindi devono essere prese precauzioni rigorose per evitare l'esposizione. Devono essere indossati DPI extra, come una maschera o un respiratore.
