用于补丁夹紧器的接触气泡层的脂质双层实验

接触气泡双层法是传统脂质双层的替代技术。这种方法允许通过膜进行更通用的振动。CBB 方法集成了平面脂层和贴片夹紧方法的益处。

作为脂质双层技术，可以形成具有任意脂质组合物的CBB。我们开发了用于高信道电流录制的 CBB，具有高信噪比。这种方法允许各种膜振动，并提供一个广泛的类型平台，以通道膜接口。

每个人都经历过吹肥皂泡的经历。通过手动微调施加的压力而不是通过嘴吹，对 CBB 形成采取类似的操作。练习和享受CBB。

以此程序，在圆底烧瓶中以所需浓度将氯仿中的磷脂分散。将磷脂溶液放在连接到氮气瓶的旋转蒸发器上。在室温下旋转烧瓶，直到出现薄磷脂膜。

接下来，将打开的烧瓶放入连接到真空泵的干燥器中。使用真空泵吸气干燥器内部数小时，彻底去除氯仿。随后，在烧瓶中加入适当体积的电解质溶液，并悬浮磷脂，每毫升磷脂悬浮液获得两毫格里。

使用沐浴声波器将悬浮液进行 20 到 30 秒的悬挂，以获得多层囊泡悬浮液。对于含有离子通道蛋白的蛋白体体制备，在多层囊泡悬浮液中加入蛋白质溶液。并使用沐浴声波器进行几秒钟的声波。

要准备大孔玻璃移液器，请将玻璃毛细管放在移液器拉拔器中，并通过两步拉拔用细锥形尖端制造微移管。然后将微管放在微锻造上，将微管的尖端接触到直径为 30 至 50 微米的锥形部分的铂丝。短暂加热灯丝并立即将其关闭。

使用蒸馏水和乙醇用浅井清洁玻璃滑梯的表面。接下来，将硅化试剂涂抹在玻璃幻灯片上，让试剂在空气中完全干燥。然后将玻璃滑梯放在倒置显微镜的舞台上。

在硅化玻璃滑梯的浅井中加入100微升六烷。使用结核素注射器填充电解质溶液，其长度高达微管的一半。接下来，将微移子设置在带压力口的微管支架上，使银/氯化银线电极浸泡在移液器电解质溶液中。

将其中一个微管支架连接到贴片夹放大器的头部阶段，将另一个微管支架连接到电气接地。随后将微控制器连接到微管支架的压力端口。使用微操纵器将微管调整到倒置显微镜舞台上方的适当位置。

要调整电极偏移电位，请将用于填充微管的相同电解质溶液的微升放在玻璃滑梯浅井周围的平坦表面上，以创建电解质圆顶。将两个微管的尖端浸泡在电解质圆顶中。随后调整贴片夹放大器的电极偏移电位。

要从尖端绘制脂体溶液，请将一微升脂体溶液添加到滑动玻璃浅井周围的平坦表面上。接下来，将微移器的尖端放在含圆顶的脂体中。使用微反应器吸气含有含脂素的溶液。

重复其他和平石对吸气通道重组脂质体的过程。现在把微管放在浅井的六角体里。通过增加压力缓慢吹吹水泡，直到气泡达到所需尺寸，并随后保持相同的压力。

如果难以保持气泡大小稳定，则通过油空气接口通过尖端来丢弃气泡。重复这些过程，直到形成两个稳定的气泡。在两个气泡之间建立接触。

微调压力以保持气泡大小，因为即使在恒定的气泡内压力下，大小也可能逐渐改变。使用贴片声明放大器将膜电位设置为适当的值，并等待通道电流的出现。为了稳定的脂质双层层形成，清洁印迹器至关重要。

玻璃毛细管或移液器制备应彻底清洗，避免被洗涤剂分子污染。一旦CBB形成通道分子，无论是水溶液或脂体，在几到几十分钟内被自发地插入到双层体中。通道的插入通过应用膜电位下电流振幅的明智增加得到确认。

CBB 方法形成的双层层可以分解为两个单层。pTB 通道电流在连接两个单层后立即出现。电流变大，因为接触增加了电流的振幅与CBB的分离连接操作同步。

如果气泡的吹出数量增加水溶液中的脂质浓度降低，并且单层未形成。然后尝试减轻脂体部分的压力。一旦CBB形成和通道重组建立，你可以尝试改变水溶液和膜的成分通过大量或注射亲水或疏水物质。

CBB 方法为探索通道膜相互作用开辟了多种途径。