弥散性念珠菌感染模型

此方法可以帮助回答在念珠菌领域有关菌株毒性和特定基因对这些过程的贡献的关键问题。这种技术的主要优点是，它避免了对动物使用的担忧，坚固、快速、便宜，并且每个实验提供大量的动物。一般来说，对这种方法有新的个体可能会有点困难，因为他们在实验开始之前很难评估蠕虫的可行性，或者他们可能有一些问题与蠕虫注射不一致。

从不向幼虫提供激素、抗生素或其他治疗的批发商和供应商订购幼虫，这些批发商和供应商能够运送和运送活标本。当幼虫到达时，检查每个容器，确认幼虫的健康和生存能力。健康的幼虫将完全淹没在床上用品下，移动，并拥有黄色，浅褐色与少数含有黑色痕迹或变色的幼虫沿身体。

幼虫可以在环境温度下储存在通风空间中的容器中长达两周。为了准备酵母细胞的画廊梅洛内拉感染，种植C.albicans菌株在三毫升新鲜酵母-肽-葡萄糖汤每株在标准培养管在中速和30摄氏度的旋转管。第二天早上，通过离心收集细胞，在五毫升的新鲜PBS离心中清洗酵母三次。

最后一次洗涤后，在一毫升新鲜PBS中重新给细胞，将酵母转移到微离心管中。连续稀释其他PBS中的细胞，浓度为1至1000，1至10万浓度，并计算1至100和1000稀释的细胞。在新型微离心管中，将细胞调整为每毫升PBS浓度的2.5倍至第7细胞，通过电镀1至10万稀释的适当体积，在一个酵母-肽-脱糖质板上实现100个菌落形成单位，用于感染。

要用念珠菌细胞感染幼虫，首先将少量蜡虫床上用品传播到一个空的、100至15厘米的无菌培养皿中，每次生物复制，然后对装有26米针的10微升注射器进行消毒，三次用10微升70%乙醇和3次每洗10微升PBS。接下来，涡旋接种稀释C.albicans，将10微升细胞加载到注射器中。打开一个G.mellonella幼虫的容器，用手指小心地把床上用品翻过来发现幼虫，选择体型相似、身体缺乏黑色色素沉着的黄色、棕褐色幼虫，用中间和食指和拇指以类似于抓铅笔的方式拾起一只幼虫。

将幼虫卷到其背上，使腿朝上，在手指和拇指之间保持身体全长，使幼虫无法卷曲或离开注射。用另一只手旋转注射器，使针斜面朝上，并缓慢地将斜面的整个长度插入与最后左腿交界处的身体，确保针头穿透身体，而不是简单地向内推幼虫的身体。在这个程序中，最关键的步骤是注射蜡虫的方式，以尽量减少对幼虫身体的损害，并接种完整的脂肪。

然后注射全10微升的念珠菌，并提取针头。接种后，每100至15毫米培养皿中注射多达10个幼虫，并在37摄氏度下孵育幼虫8天。每24小时检查一次餐具，以监测死亡情况。

死亡率最初可以通过变暗色素沉着、黑斑或身体的形成以及缺乏运动来评估。为了确认死亡率，用钳子轻轻地将垂死的幼虫卷到背上，用钳子轻轻戳幼虫的底面。开始幼崽进入飞蛾的幼虫可以包含在分析中，但如果它们开始剥落，就应该将其移除。

幼虫感染零或抵达后10天之间，G.mellonella死亡的动力学没有显著差异。幼虫的特征症状出现在两个年龄的幼虫中，这些年龄都死于感染，从变色开始，在完全失去活力并最终死亡之前，这种变色让位给黑斑。感染C.albicans加快了这种变色和发病的过程，但与未感染或PBS注射的幼虫相比，并没有显著改变导致死亡的表型标记的级联。

值得注意的是，与PBS注射的动物相比，G.mellonella感染任何经测试的临床分离的C.albicans菌株的交配型样同性或异质酶，可产生高死亡率，而原生衍生菌株的注射则减弱了该模型中的致命效应。重要的是要记住选择健康的幼虫，并温柔地处理幼虫。如果多个菌株将被接种，注意不要让念珠菌细胞在PBS中坐得太久。

按照这个程序，其他方法，如免疫学分析和在幼虫中的念珠菌定位，可以回答有关宿主和真菌病原体在感染期间相互作用的其他问题。开发后，该技术为研究人员使用高通量格式探索念珠菌发病机制铺平了道路。不要忘记，与 Candida albicans 合作需要小心，执行此程序时应始终采取标准预防措施，包括个人防护设备的磨损。