Bu yöntem, candida alanında suş virülansı ve belirli genlerin bu süreçlere katkıları hakkında anahtar soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Bu tekniğin başlıca avantajları, hayvan kullanımı ile ilgili endişeleri önler, sağlam, hızlı, ucuz ve deney başına hayvan sayısı nın yüksek olmasını sağlar. Genel olarak konuşursak, bu yönteme yeni olan bireyler büyük olasılıkla biraz mücadele edeceklerdir, çünkü denemenin başlangıcından önce solucanların canlılığını değerlendirmekte biraz zorluk çekerler veya solucanların tutarsız enjeksiyonu ile ilgili bazı sorunlar yaşayabilirler.
Larvalara hormon, antibiyotik veya diğer tedavileri tanıtmayan ve canlı numuneleri gönderip teslim edebilen toptancılardan ve tedarikçilerden larva sipariş imretmek. Larvalar geldiğinde, larvaların sağlığını ve canlılığını doğrulamak için her konteynırı kontrol edin. Sağlıklı larvalar tamamen yatak altında batırılmış olacak, hareketli, ve vücut boyunca siyah işaretleri veya renk değişiklikleri içeren birkaç larva ile sarı, açık tan renklendirme sahip.
Larvalar, iki haftaya kadar ortam sıcaklığında havalandırılan bir alanda kaplarında saklanabilir. Galleria mellonella enfeksiyonu için maya hücreleri hazırlamak için, c.albicans suşları bir gecede taze maya-pepton-dekstroz suyu standart kültür tüpleri standart kültür tüpleri başına üç mililitre enjekte edilecek büyümek orta hızda dönen bir davul ve 30 derece santigrat. Ertesi sabah, santrifüj ile hücreleri toplamak ve taze PBS santrifüj beş mililitre üç kez maya yıkayın.
Son yıkamadan sonra, taze PBS bir mililitre hücreleri resuspend ve bir mikrosantrifüj tüp içine maya aktarın. Bire 100, bire 1, 000 ve 1-100,000 konsantrasyonlarda ek PBS'deki hücreleri seri olarak seyreltin ve hücreleri 1'e 100 ve 1'e 1,000 seyreltmelerden sayar. Hücreleri yeni bir mikrosantrifüj tüpünde PBS konsantrasyonunun mililitrebaşına 2,5 katı 10'a ayarlayın ve enfeksiyonda kullanılacak her kültür için bir maya-pepton-dekstroz tabakası üzerinde 100 koloni oluşturma ünitesine ulaşmak için 100 adet koloni oluşturma ünitesini elde etmek için 1-100'e kadar olan seyreltme hacmini kaplamak suretiyle enfeksiyöz dozun doğruluğunu onaylayın.
Larvaları Candida hücreleriyle enfekte etmek için, ilk olarak küçük miktarda balmumu solucanı biyolojik çoğaltma başına 100 x 15 santimetrelik steril Petri kabına yayın ve 10 mikrolitrelik bir şırıngaile 26-gauge iğne ile donatılmış 10 mikrolitrelik şırıngayı üç kez sterilize edin, 10 mikrolitrelik bir iğneyi %70 etanol 10 mikrolitre ve yıkama başına 10 mikrolitre PBS ile üç kez sterilize edin. Sonra, C.albicans aşıseyreltme girdap ve şırınga içine hücrelerin 10 mikrolitre yükleyin. G.mellonella larvaları bir konteyner açın ve dikkatle larvaları ortaya çıkarmak için yatak açmak için bir parmak kullanın, vücutlarında siyah pigmentasyon eksikliği ile sağlıklı sarı, tan larvaları seçerek, orta ve işaret parmakları ve başparmak kullanarak bir kalem kavramaya benzer bir şekilde bir larva almak için.
Larvayı sırtına yuvarlayın, böylece bacaklar yukarı bakacak, vücudun tüm uzunluğunu parmaklar ve başparmak arasında tutarak larva kıvrılamaz veya enjeksiyondan uzaklaşamaz. Diğer elinizle, şırıngayı, iğne eğiminin yukarı bakacak şekilde döndürün ve en arkadaki sol bacakla kavşakta eğimin tüm uzunluğunu yavaşça vücuda takın, iğnenin vücuda nüfuz etmesini ve larvanın gövdesini içe doğru itmemesini sağlar. Bu işlemin en kritik adımı, larva gövdesine verilen zararın en aza indirilen ve tam bolus aşılanır şekilde balmumu solucanenjeksiyonudur.
Sonra Candida inoculum tam 10 mikrolitre enjekte ve iğne ayıklayın. Aşılamayı takiben her 100 x 15 milimetrelik Petri kabında aynı Candida kültüründen enjekte edilen 10 larvayı bir arada barındırın ve larvayı sekiz gün boyunca 37 derecede kuluçkaya yatırın. Ölümü izlemek için her 24 saatte bir bulaşıkları kontrol et.
Mortalite başlangıçta koyu pigmentasyon tarafından değerlendirilebilir, siyah yamalar veya organların oluşumu, ve hareket eksikliği. Mortaliteyi doğrulamak için, cımbızkullanarak larvaları sırtlarına hafifçe yuvarlayın ve larvaların alt tarafını cımbızla hafifçe dürtün. Güveler halinde pupate başlar Larvalar analize dahil edilebilir ancak erimeye başlarsa çıkarılmalıdır.
G.mellonella ölüm kinetiği önemli bir fark larvaenfekte sıfır veya varıştan 10 gün sonra arasında var. Hastalığın karakteristik belirtileri enfeksiyona yenik her iki yaştan larvalarda ortaya çıkar, toplam hareketlilik kaybı ve sonunda ölümden önce siyah yamalar yol verir renk değişikliği ile başlayan. C.albicans ile enfeksiyon renk değişikliği ve morbidite bu süreci hızlandırır ama önemli ölçüde enfekte olmayan veya PBS enjekte larvaları ile karşılaştırıldığında ölüme yol açan fenotik belirteçlerin basamaklı değiştirmez.
Özellikle, test edilen klinik olarak izole edilmiş C.albicans suşlarının herhangi birinden çiftleşme tipi benzeri homo-veya heterozigotlarla G.mellonella enfeksiyonu PBS enjekte edilen hayvanlara göre yüksek mortalite oranları üretirken, prototrofik türev suşların enjeksiyonları bu modeldeki öldürücü etkiyi zayıflatır. Sağlıklı larvaları seçmeyi ve larvaları idare etmede nazik olmayı unutmamak önemlidir. Birden fazla suş aşılanacaksa, Candida hücrelerinin PBS'de çok uzun süre bekletmemeye özen.
Bu prosedürü takiben, bir enfeksiyon sırasında konak ve mantar patojeni arasındaki etkileşimler hakkında ek soruları cevaplamak için immünolojik profilleme ve larva içinde Candida lokalizasyonu gibi diğer yöntemler de uygulanmaktadır. Bu teknik, geliştirildikten sonra araştırmacıların yüksek iş lenme biçimleri kullanarak Candida patogenezini keşfetmelerinin yolunu açmıştır. Candida albicans ile çalışan bakım gerektirir ve kişisel koruma ekipmanları nın aşınması da dahil olmak üzere standart önlemler, her zaman bu prosedürü gerçekleştirirken alınması gerektiğini unutmayın.
