该协议描述了PODS的合成和应用，PODS是一种用于蛋白质和肽的特异性生物结合的新试剂。这项技术比传统的雄胺-硫醇基生物结合技术有了明显的提高。此过程的最大优点是试剂的制造简单性。
该方法允许几乎在任何实验室合成试剂。在10毫升圆底烧瓶中，将100毫克的氨基苯丙胺氧化二醇溶解在三毫升甲醇中。在溶液中，加入360微升二乙基胺和磁搅拌棒。
用橡胶塞密封烧瓶，并在室温下搅拌溶液 10 分钟。使用一毫升玻璃注射器，在橡胶塞上戳一个洞，并迅速在混合物中加入32微升的碘烷。让混合物在室温下反应45分钟。
在25毫升的圆底烧瓶中，将387毫克的Bobo保护的二氯甲烷溶解在10毫升的二氯甲烷中。在溶液中，加入480微升二乙基乙胺、264毫克EDCI、200毫克苯胺和磁搅拌棒。用玻璃塞子密封烧瓶，让反应在室温下搅拌五天。
反应完成后，将反应混合物转移到分离漏斗中，用五毫升一摩尔盐酸洗涤三次。收集有机相并转移到分离漏斗。然后用一摩尔碳酸钠洗净有机相，然后用水。
接下来，收集有机相并添加硫酸镁，以去除任何水的痕迹。然后使用中玻璃褶皱过滤混合物。使用旋转蒸发器，在减压下去除挥发性溶剂，以提供非白色固体。
在此之后，在10毫升乙酸乙酯中重新溶解分离的固体。然后通过逐渐添加30毫升环氧烷沉淀产品。使用中玻璃褶皱过滤溶液，以获得作为白色粉末的卡巴马特产品。
在10毫升的圆底烧瓶中，将30毫克的甲壳素溶解在4毫升二氯甲烷中。慢慢地将49毫克70%m-氯苯酚酸和磁搅拌棒加入混合物中，用玻璃塞子密封烧瓶。在室温下隔夜搅拌溶液，最终产生黄色混合物。
第二天，将混合物转移到分离漏斗。然后用0.1摩尔氢氧化钠先用水清洗混合物。收集有机相并添加硫酸镁，以去除任何水的痕迹。
然后使用中玻璃褶皱过滤混合物。在25毫升的圆底烧瓶中，将30毫克的甲酸酯溶解在两毫升二氯甲烷中。在混合物中加入磁搅拌棒。
400微升三氟乙酸，用玻璃塞子封住烧瓶。然后在室温下搅拌反应混合物三小时。反应完成后，使用旋转蒸发器在室温下降低压力下去除挥发性，以获得油性残留物。
将油性残留物溶解在7毫升水中。并转移到分离漏斗。用四毫升乙酸乙酯洗三次水溶液。
在1.5毫升的微离心管中，溶解10毫克PODS和300微升二甲基硫化物。然后加入26微升的N，二二丙乙胺到溶液中。将 15.2 毫克 DOTA NCS 溶解在 100 微升二甲基硫化物中，并将溶液与 PODS 溶液结合使用。
密封微离心管，让反应在室温下孵育过夜。接下来，在低蛋白结合的1.5毫升微离心管中，用859微升PBS稀释61微升的trastuzumab库存溶液。在这种混合物中，在水中加入6.7微升新鲜制造的10毫升TCEP溶液。
在反应混合物中加入73微升每毫升1毫克PODS-DOTA溶液。最后，密封微离心管，在室温下孵育溶液两小时。PODS 合成是稳健可靠的。
脱蛋白和替代氨基苯二甲酸酯硫醇在定量产量上给予硫醚一剂。硫化一和bobo保护的碳氧酸的连结在55%的收益率中产生化合物二。氧化提供化合物三在90%的屈服。
去除boss保护组，产生的PODS在98%的收益率。通过质子 NMR、碳 NMR 和高分辨率 MS 确认每种产品的身份。切合器DTA的同位素含物变种与PODS的吊坠胺耦合，获得75%的双功能溷合器。通过质子 NMR、碳 NMR 和高分辨率 MS 确认产品的身份。此处显示了 PODS-DOTA 与 HER2 靶向抗体的位点选择性生物结合。
抗体铰链区域的二硫化物链接被选择性地降低，然后用PODS-DOTA孵育抗体，使带有DTA的免疫结合得到80%的产生。MALDI-TOF 分析显示每个抗体的标签度为 1.8 DOTA。在一系列人类、人性化和嵌合性IgG1抗体中保持一致。
然而，同样的条件产生免疫结合，对于MurineIgG1抗体，其标记度为1.5。由于这种化合物的光敏性，重要的是保持所有反应在铝箔覆盖的容器。这将增加产品的整体产量。
虽然该协议描述了PODS-DOTA的合成，但类似的程序可以适用于各种潜在的货物，包括荧光团、毒素和其他溷合剂。这种方法将促进定义明确、同质和高度稳定的免疫结合的构建，这些免疫结合可用于各种领域。重要的是要记住，在这个实验的第一步中添加的碘烷可以产生有害影响，因此应该用在烟罩中。
