用于细胞表征和分泌特征的人类脂肪组织微分裂

利用这个系统，我们可以收集人类脂肪组织的亚毫米聚类，其中再生细胞的整个微环境是完好无损的。整个微血管系统也是完好无损的，因此我们可以使用这种微器官进行体内移植，用于体外培养和细胞分离，以进一步进行表征。在研究实验室中使用该系统的主要理由是，该工艺是完全无酶的，因此它允许快速、高效地处理人体脂肪组织，同时保持微结构，并且它将成为完全完好无损的组织微创体。

因此，我们可以直接研究一种细胞治疗产品，它已被证明在临床上非常有用。这种封闭式系统技术是一种易于使用的技术，用于术内收获、加工和再注射精制脂肪组织，可成功应用于美容骨科、产学科和妇科。这种方法允许进一步研究脂肪对组织再生的影响。

该程序将由博士后研究员比安卡·韦扎尼和博士生马里奥·戈麦斯-萨拉萨尔进行演示。在收获后 16 小时内的无菌条件下工作，将包皮成形术样品放在手术布上，皮肤朝上。使用一次性组织渗透管将50至100毫升37摄氏度的0.9%氯化钠溶液注射到皮下脂肪组织中。

将 10 毫升 Luer 锁注射器连接到一次性抽脂管，并在样品边缘附近的皮肤区域抓住样品，小心地将该管引入脂肪组织。一旦管管在组织内，提取柱塞，并在脂肪组织样品中径向移动管。在吸脂过程中，必须牢固地处理脂肪组织。

如果收集没有足够的脂肪，请考虑执行额外的盐水注射。当注射器充满脂吸酸盐时，小心地从组织中取出管，用新的空注射器更换整个注射器，直到总共收获了 60 毫升的吸气剂。对于吸脂物的微碎块，请从包装上取出设备，并验证主装置是否连接到废纸袋。

将废物收集袋放在地面上，并确保阀门固定在工艺单元盖上。刺穿袋连接端口，将输入线的端子尖峰连接到盐水袋中，并放置高于加工单元的盐水袋。验证连接到电路管的所有五个夹具是否打开，将处理单元放在垂直位置，允许盐水溶液填充处理单元，并确认流量到达废袋。

摇动加工单元以清除任何气泡，将装置放置到垂直位置，蓝色盖朝上。关闭输入管路旁边的夹紧，将吸脂剂注射器连接到蓝色输入盖的自封阀，开始注射脂吸气剂。保持加工单元垂直，缓慢向下推注射器柱塞，直到所有吸脂剂已转移到装置。

当所有脂吸气剂都已注入时，打开输入夹以恢复盐水流量，并大力摇动加工单元至少两分钟，定期检查盐水溶液流入废袋。当加工单元中的盐水溶液变为透明时，将带灰色盖的装置向上放置，并关闭位于靠近蓝色和灰色盖的排水管上的夹子。加工过的组织将漂浮在顶部。

接下来，用盐水溶液填充 10 毫升 Luer 锁注射器，然后将注射器连接到蓝色盖的装载阀。将空的 10 毫升 Luer 锁注射器与柱塞完全插入灰帽阀上。从蓝色盖子将盐水牢固地注入加工单元，检查连接到灰色阀的注射器是否因此被加工组织填充。

当所有盐水被注射后，小心地取出两个注射器并重复盐水输液，直到收集所有加工过的组织。在加工结束时，取出所有注射器，关闭所有夹子，分离盐水袋，并按照当地协议处置设备。收集所有加工组织后，将微碎脂肪组织转移到无菌容器中，并将等量的消化介质添加到容器中。

将密封容器放在37摄氏度的摇水浴中，设置为每分钟120次旋转45分钟，在孵化结束时用同等体积的阻尼溶液停止消化。顺序过滤样品，首先通过100微米细胞过滤器，然后通过70微米细胞滤株过滤，然后以200倍g将过滤的悬浮液离心5分钟。我们在室温下将颗粒悬浮在大约5毫升的红细胞解液缓冲液中15分钟。

用等量的阻尼溶液停止解，并通过 40 微米电池滤株过滤溶液。然后通过离心收集微碎脂肪组织细胞，我们将颗粒悬浮在新鲜阻块溶液中，用面粉混合进行计数。分离和抗体染色后，微碎脂肪细胞可被带到流动细胞仪进行细胞分析和/或分拣。

手动吸脂物的机械分离导致微碎片脂肪组织的生产，这种组织由包裹微血管网络的脂肪细胞的聚集体组成。嵌入低温冷冻微碎脂肪组织中的明胶的免疫荧光分析突出了结构，显示了以内皮细胞标记 Ulex Europaeus Agglutinin 1 受体为标志的血管网络，主要由小毛细血管状血管组成。值得注意的是，表达神经元-胶质抗原2或血小板衍生生长因子受体β的周利源是正向分布的，是内皮细胞。

通过排除CD31阳性内皮和CD45阳性造血细胞，可以在MAT中识别CD146阳性CD34阴性造血和CD146阳性和CD34阳性造发细胞的存在。微碎脂肪组织可以通过免疫组织化学染色、体外培养或分泌物分析进一步加工，以更深入地了解脂肪组织生物学。

这项技术允许研究各种组织在自然，本地，三维排列作为一种小器官，这是小到足以移植在小鼠或长期培养。我们主要利用这个系统来实验不同的器官特异性微环境。我们的脂肪组织捐赠者不被称为可传播感染的携带者。

然而，在没有任何进一步筛查的情况下，所有人体组织应被视为潜在污染，并据此处理。