باستخدام هذا النظام، يمكننا جمع مجموعات دون ملليمتر من الأنسجة الدهنية البشرية، التي البيئة الدقيقة كلها من الخلايا المتجددة سليمة. النظام الأوعية الدموية الدقيقة بأكمله هو أيضا سليمة، وحتى نتمكن من استخدام هذا النوع من الأعضاء الدقيقة لزرع في vivo لثقافة في المختبر وعزل الخلايا لمزيد من التوصيف. الأساس المنطقي الرئيسي لاستخدام النظام في مختبر البحوث هو أن العملية خالية تماما من الإنزيمات ، وهكذا يسمح بمعالجة سريعة وفعالة للأنسجة الدهنية البشرية مع الحفاظ على بنية صغيرة وسيكون microvasculature من الأنسجة سليمة تماما.
وهكذا يمكننا أن ندرس مباشرة منتج العلاج بالخلايا التي أثبتت بالفعل مفيدة جدا في العيادة. هذه التكنولوجيا نظام مغلق هو تقنية سهلة الاستخدام لحصاد ومعالجة وإعادة حقن الأنسجة الدهنية المكررة داخل العملية، ويمكن تطبيقها بنجاح في مستحضرات التجميل العظام، المستقيم، وأيضا أمراض النساء. هذه الطريقة تسمح بمزيد من الدراسة لتأثير الدهون في تجديد الأنسجة.
سيتم إظهار الإجراء من قبل بيانكا فيزاني، زميل ما بعد الدكتوراه وماريو غوميز سالازار، وهو طالب دكتوراه. العمل في ظروف اتعفن في غضون 16 ساعة من الحصاد، وضع العينة البطن على رأس قطعة قماش جراحية مع الجلد التي تواجه صعودا. استخدام قنية تسلل الأنسجة القابل للتصرف لحقن 50 إلى 100 ملليلتر من 37 درجة مئوية 0.9٪ محلول كلوريد الصوديوم في الأنسجة الدهنية تحت الجلد.
ربط 10 ملليلتر لور قفل حقنة إلى قنية شفط الدهون المتاح واستيعاب العينة في المنطقة الجلدية بالقرب من حافة العينة، وإدخال بعناية كانية في الأنسجة الدهنية. مرة واحدة في قنية داخل الأنسجة، واستخراج المكبس ونقل القنية شعاعي داخل عينة الأنسجة الدهنية. من المهم التعامل مع الأنسجة الدهنية بحزم خلال الشفط.
إذا لم يتم جمع ما يكفي من الدهون، والنظر في إجراء حقن ملحية إضافية. عندما تكون الحقنة مليئة بالتبخر ، قم بإزالة القنب بعناية من الأنسجة واستبدل الحقنة الكاملة بحقنة فارغة جديدة حتى يتم حصاد ما مجموعه 60 ملليلترًا من الpirate. بالنسبة للتشظي الجزئي للنيبو- التعرق، قم بإزالة الجهاز من العبوة وتحقق من توصيل الوحدة الرئيسية بحقيبة النفايات.
ضع كيس جمع النفايات على الأرض، وتأكد من أن الصمامات مؤمنة لأغطية وحدة المعالجة. يخترق منفذ اتصال الحقيبة لتوصيل ارتفاع المحطة الطرفية لخط الإدخال في كيس الملحية ووضع الحقيبة المالحة أعلى من وحدة المعالجة. تحقق من أن جميع المشابك الخمسة المتصلة بأنابيب الدوائر مفتوحة ، ووضع وحدة المعالجة في وضع عمودي ، والسماح للمحلول الملحي لملء وحدة المعالجة ، والتأكد من أن التدفق يصل إلى كيس النفايات.
هز وحدة المعالجة لإزالة أي فقاعات الهواء ووضع الوحدة في وضع عمودي مع الغطاء الأزرق التي تواجه صعودا. أغلق المشبك بجوار خط الإدخال وتوصيل حقنة من الpirate lipo إلى الصمام الذاتي المُكدّس لغطاء الإدخال الأزرق للبدء في حقن الpirate lipo. الحفاظ على وحدة معالجة عمودي، ببطء دفع لأسفل على المكبس حقنة حتى تم نقل كل من التعرق ليبو إلى وحدة.
عندما تم حقن كل من يبو-سبيرات، فتح المشبك المدخلات لاستعادة تدفق المالحة وهز بقوة وحدة المعالجة لمدة دقيقتين على الأقل، والتحقق بانتظام من تدفق محلول ملحي في كيس النفايات. عندما يتحول المحلول الملحي في وحدة المعالجة إلى شفاف، ضع الوحدة مع الغطاء الرمادي لأعلى واغلق المشابك الموجودة على التصريف بالقرب من كل من الأغطية الزرقاء والرمادية. سوف تطفو الأنسجة المجهزة في الجزء العلوي.
المقبل، ملء 10 milliliter Luer قفل حقنة مع محلول ملحي، وربط حقنة لصمام التحميل من الغطاء الأزرق. توصيل فارغة 10 milliliter Luer قفل حقنة مع المكبس إدراجها تماما إلى صمام الغطاء الرمادي. حقن بحزم المالحة في وحدة المعالجة من الغطاء الأزرق، والتحقق من أن الحقنة المتصلة صمام رمادي يتم بالتالي شغلها مع الأنسجة المجهزة.
عندما تم حقن كل من المالحة، وإزالة بعناية كل من المحاقن وتكرار ضخ المالحة حتى تم جمع جميع الأنسجة المصنعة. في نهاية المعالجة، وإزالة جميع المحاقن، وإغلاق جميع المشابك، وفصل كيس المالحة، والتخلص من الجهاز وفقا للبروتوكولات المحلية. عندما تم جمع جميع الأنسجة المعالجة، ونقل الأنسجة الدهنية مجزأة micro-مجزأة في وعاء معقمة، وإضافة حجم متساو من وسط الهضم للحاوية.
وضع حاوية مختومة في 37 درجة مئوية يهز حمام الماء، تعيين إلى 120 دوران في الدقيقة لمدة 45 دقيقة، ووقف الهضم مع حجم مساو من حل منع في نهاية الحضانة. بالتسلسل تصفية العينة، أولا من خلال مصفاة خلية ميكرومتر 100 تليها الترشيح من خلال مصفاة خلية ميكرومتر 70 والطرد المركزي تعليق المصفاة لمدة خمس دقائق في 200 مرة ز. نحن نعلق بيليه في حوالي 5 ملليلتر من تحلل كريثجليت العازلة لمدة 15 دقيقة في درجة حرارة الغرفة.
وقف تحلل مع حجم متساو من حل حجب وتصفية الحل من خلال مصفاة خلية ميكرومتر 40. ثم جمع خلايا الأنسجة الدهنية المجزأة الصغيرة عن طريق الطرد المركزي ونوقف بيليه في محلول منع جديد مع مزج الدقيق للعد. بعد التفكّك وتلطيخ الأجسام المضادة، يمكن أخذ الخلايا الدهنية المجزأة الصغرى إلى مقياس التدفق الخلوي لتحليل الخلايا و/أو الفرز.
يؤدي الانفصام الميكانيكي للنيبوة التعرق اليدوي إلى إنتاج الأنسجة الدهنية المجزأة الصغيرة التي تتكون من مجموعة من الخلايا الشحمية التي تغلف شبكة الأوعية الدموية الدقيقة. تحليل immunofluorescence من الجيلاتين جزءا لا يتجزأ من الأنسجة الدهنية micro-مجزأة المبردة يسلط الضوء على هيكل, تبين شبكة الأوعية الدموية التي تميزت علامة الخلية endothelial Ulex Europaeus Agglutinin 1 مستقبلات ويتكون أساسا من الأوعية الصغيرة مثل الشعيرات الدموية. وتجدر الإشارة إلى أن بيريكيتس التي تعبر عن مستضد الخلايا العصبية الدبقية 2 أو مستقبلات عامل النمو المشتقة من الصفائح الدموية يتم توزيعها عادة، وهي الخلايا البطانية.
باستبعاد CD31 إيجابية البطانية وD45 خلايا الدم الإيجابية, وجود CD146 إيجابية CD34 ال بيريكات سلبية وDD146 الخلايا السلبية وD34 يمكن تحديدها في MAT. دليل lipo-الطموح هو جزء حاسم من العملية ويجب أن يؤديها في ظروف معقمة لا يزيد عن 16 ساعة بعد عملية شد البطن. يمكن معالجة الأنسجة الدهنية المجزأة الصغيرة عن طريق التلطيخ المناعي، في الثقافة في المختبر أو التحليل السري للحصول على نظرة أعمق في بيولوجيا الأنسجة الدهنية.
تسمح هذه التقنية بدراسة الأنسجة المتنوعة في ترتيبها الطبيعي ، الأصلي ، ثلاثي الأبعاد كنوع من الأعضاء الصغيرة ، والتي هي صغيرة بما يكفي لزرعها في الفئران أو للحفاظ عليها في ثقافة طويلة الأجل. ونحن نستخدم هذا النظام أساسا للاقتراب تجريبيا من مختلف البيئة الدقيقة الخاصة بالأعضاء. لا يعرف المتبرعون لدينا الأنسجة الدهنية كناقلة العدوى المنقولة.
ولكن في غياب أي فحص آخر، ينبغي اعتبار جميع الأنسجة البشرية ملوثة محتملة ومناولته وفقاً لذلك.
