用于向小鼠眼睛输送生物制剂的封装细胞技术

该技术是将药物、蛋白质或细胞等任何内容传递到组织或动物中特定位置的一种可靠方法。您可以跟踪交付并调整内容的发布，以符合您想要的实验。它可用于治疗从伤口愈合到眼部和心脏病的许多疾病。

这种方法的主要优点是能够使用藻酸盐微胶囊将治疗细胞送到目标位点，而不会引起任何免疫反应，并持续持续提供新鲜分泌的治疗药物更长时间。首先根据手稿方向培养视网膜上皮细胞。使用标准组织培养程序，当细胞达到70至80%的汇合时，通过细胞。

为了封装细胞，将藻酸钠与去离子水混合，最终浓度为2%的重量，然后用0.2微米无菌注射器过滤器通过过滤净化混合物。用10毫摩尔 HEPES 缓冲盐水溶液对细胞进行试穿、离心和清洗。使用血细胞计计算细胞，将最终细胞浓度调整为每毫升藻酸溶液一百万。

将藻酸盐和细胞混合物的300微升等分装入三毫升注射器中，并将其连接到注射器泵上。根据手稿指示准备凝胶浴，并放在注射器尖端下方的无菌 50 毫升烧杯中，以 7 毫米针进行沐浴喷洒距离。将电压调整为 8 千伏，将流量调整为每小时 30 毫米，以产生约 150 微米的微胶囊。

将黑色接地夹连接到半浸在凝胶浴中的铜线，然后将红色阳极导线的夹子连接到针上。从每毫升的藻酸盐和细胞混合物中准备封装的细胞大约需要30分钟。形成后，用洗涤溶液洗涤微胶囊两次，并在37摄氏度和5%CO2的加湿培养箱中用10%FBS补充DMEM介质孵育。

经过24小时的孵育，制备500微升微胶囊样品，在洗涤液中清洗两次，进行染色。使用 LIVE/死亡检测套件来染色以获得生存能力。为确保微胶囊大小适当，在无血清介质中稀释。

用 2.5 微升汉密尔顿注射器小心吸气。缓慢地将一个微升滴滴弹射到显微镜幻灯片上，并使用直立的 Brightfield 显微镜确定微胶囊的完整性。在适当麻醉的小鼠中，涂抹眼部润滑剂以保持眼睛水分，并使用 26 量表 3/8 英寸斜面注射器针在边缘下方建立初始眼穿刺。

确保以 45 度角从鼻向接近眼睛，使斜面尖端向上，以避免透镜穿孔。接下来，确保将整个针尖插入眼部以生成导孔，但要小心不要走得太远并刺穿时间视网膜。完成后，慢慢缩回针头。

在微操纵器内，放置一个 27 量表钝尖端 2.5 微升汉密尔顿注射器，该注射器已充满胶囊溶液，并用初始导孔将针头向上线。将动物的头保持稳定的位置，并故意将针头转向眼睛。为确保在玻璃内有正确的针头位置，请插入注射器，直到针尖在镜头后面可视化。

然后在25至30秒内缓慢注射胶囊溶液。完成后，逐渐收回钝尖注射器，以尽量减少对眼睛的伤害。如有必要，根据手稿方向调整电压和流速，调整胶囊尺寸。

用布莱特菲尔德成像证实了藻酸盐细胞的封装，LIVE/死检测表明90%的细胞在封装后是可行的。通过溶解柠檬酸钠中的胶囊和重放，确保了细胞的长期生存能力。内注射是在目视检查下进行的，允许玻璃胶囊的可视化。

尝试此过程时，不要将 PBS 用于任何洗涤步骤，因为 PBS 溶解形成藻酸盐微胶囊。经过开发，我们的实验室被用作一种输送系统，用于治疗心力衰竭和高血压。这项技术被认为是未来治疗不同心血管和神经系统疾病的有希望的工具。