高频超声超声心动图评估斑马鱼心脏功能

该协议允许非侵入性和高分辨率的表示和分析成年斑马鱼的心脏功能。此方法可用于验证成人心脏病模型和潜在的药物屏幕。该技术允许鱼的快速定位，以正确的成像提供准确和可重复的结果。

它是无创的，在水下进行，允许鱼的快速恢复。要设置图像采集平台，请使用小剪刀或手术刀在 12 点钟位置对海绵进行切口。将海绵放在玻璃容器中。

使用双面胶带，将装有海绵的玻璃容器贴在超声波平台上。确保玻璃容器位于平台的中心并牢固连接。使用平台支架左侧的旋钮向前倾斜平台约 30 度。

在玻璃容器中填充大约200毫升的鱼系统水，每毫升三分之一甲烷硫化酯含有0.2毫克。将传感器插入工作火车站的微操纵器支架内，将传感器的槽口转向操作员。使阵列与地面平行，工作侧与舞台保持纵向关系。

在两侧留下足够的空间，让现在连接的传感器导轨系统沿 x 轴和 y 轴移动。登录到控制软件并选择鼠标小血管。为研究中诱导的每个动物创建一个新的研究以及一个新的系列。

按浏览器页面上屏幕左下角的新研究按钮。视图以 B 模式启动。使用鱼网将鱼转移到一个装有系统水的小水箱中，每毫升三分鱼含有0.2毫克。

等到鱼完全麻醉，没有运动或没有反应触摸。轻轻地快速将鱼与海绵一起转移到玻璃容器中，将鱼的腹侧朝上。使用导轨系统上的手柄轻轻降低传感器，将其纵向放置，并关闭鱼的腹侧，传感器的凹口朝向操作员。

从鱼中留下两到三毫米的间隙。使用所有三个轴中的微操纵器调整与传感器的平台，直到鱼心被可视化。本地化心脏后，立即选择或停留在 B 模式，通过放大来缩小字段，以便更近距离地查看心脏。

如果需要，通过将动态范围设置为 45 到 50 分贝来增强图像的质量或对比度。转到更多控件选项中的 B 模式控件，然后将更改为模式预设。点击模式预设，在开始新系列成像之前，每次选择优化的图像采集设置。

在长轴平面上拍摄尽可能多的图像。接下来，切换到彩色多普勒，用于血流检测和采集。使用触摸屏，将象限放置在电顶阀的顶部，并定位由红色信号区分的流入。

尽可能减少象限区域以增加帧速率。激活脉冲波多普勒移动到样本心室血液流入速度。将样品体积门放置在发动机舱阀中心，以检测最大流量。

红色信号变得更黄。使用手指调整屏幕上的脉冲波角度，使其与血液流入的方向对齐。按"开始"或"更新"开始采样流入心室的血液速度。

通过将彩色多普勒象限放置在心室和球茎之间的交界处并确定流出速度，并本地化流量。这通过蓝色信号进行区分。将样品体积栅极位于心室球形结交汇点前，并调整角度校正线以匹配血流方向。

调整在流速面板中提升的基线，以便完全检测和跟踪信号峰值。一旦图像采集完成，使用茶匙，将鱼转移到常规系统中，无三水加水，让鱼恢复。为了帮助恢复，使用转移移液器反复在刺上喷水，以促进水和氧气的加气。

它通常需要30秒到2分钟才能恢复刺运动和游泳。打开图像分析软件。选择一个图像并单击图像处理图标。

调整图像的亮度和对比度，以便清晰地可视化心室壁或血流模式。使用 B 模式图像，从心脏包测量上的准星长轴选项打开下拉列表。选择LV微量和跟踪心室内壁在systole和舒舒斯托，以获得心室面积在systole和舒张和舒张体积和结束收缩体积。

本研究认为，B模式图像允许跟踪囊肿和隔膜内壁的内壁，并获取室和壁尺寸等尺寸数据。还获得了心率、中风体积、心脏输出等功能数据，以及心室收缩功能参数，包括小数面积变化和弹出分数。使用彩色多普勒模式图像进行心室进气阀水平的测量也提供了心室流入和流出血液速度。

基于脉冲波多普勒图像，通过跟踪连续三个大音流峰产生心率值。最重要的是正确定位超声波平台和鱼，以进行准确的成像，并最大限度地减少鱼对三元鱼的接触。支持此程序的其他方法包括鱼心电图，用于快速检测心脏功能障碍，如心律失常或组织学方法，以评估心脏组织结构或细胞死亡。

这些技术允许评估斑马鱼的心脏功能，并在斑马鱼心脏病模型中建立心脏表型。它还允许测试新药，研究心脏损伤和再生能力。三金MS-222是一种皮肤、眼睛和呼吸刺激物。

在准备三金溶液时，防护设备应包括防尘面具、眼罩和手套。