Le protocole permet une représentation et une analyse non invasives et à haute résolution de la fonction cardiaque adulte du poisson zèbre. Cette méthode peut être utilisée pour la validation des modèles de maladies cardiaques chez les adultes et des dépistages potentiels des médicaments. Cette technique permet un positionnement rapide du poisson pour une imagerie correcte fournissant des résultats précis et reproductibles.
Il est non invasif et exécuté sous l’eau qui permet le rétablissement rapide du poisson. Pour configurer la plate-forme d’acquisition d’images, utilisez de petits ciseaux ou un scalpel pour faire une incision sur une éponge à la position de 12 heures. Placer l’éponge dans un récipient en verre.
À l’aide de ruban adhésif à double face, apposer le contenant en verre contenant l’éponge sur la plate-forme d’ultrasons. Assurez-vous que le contenant en verre est au centre de la plate-forme et solidement fixé. Inclinez la plate-forme vers l’avant d’environ 30 degrés à l’aide du bouton sur le côté gauche du support de la plate-forme.
Remplissez le récipient en verre d’environ 200 millilitres d’eau du système de poisson contenant 0,2 milligramme par millilitre de méthane tricaineulfonate. Insérez le transducteur dans le support du micromanipulateur sur la gare de travail en tournant l’encoche du transducteur vers l’opérateur. Gardez le tableau parallèle au sol avec le côté de travail longitudinal par rapport à la scène.
Laissez suffisamment d’espace à environ 10 centimètres des deux côtés pour que le système ferroviaire transducteur maintenant connecté se déplace le long des x et des haches y. Connectez-vous au logiciel de contrôle et choisissez souris petit vasculaire. Créez une nouvelle étude ainsi qu’une nouvelle série pour chaque animal induite dans l’étude.
Appuyez sur le nouveau bouton d’étude situé en bas à gauche de l’écran sur la page du navigateur. La vue commence en mode B. À l’aide d’un filet de poisson, transférer le poisson dans un petit réservoir contenant de l’eau du système avec 0,2 milligramme par millilitre de tricaine.
Attendez que le poisson soit entièrement anesthésié sans mouvement ni réponse au toucher. Transférer délicatement et rapidement le poisson dans le récipient en verre avec l’éponge dans l’incision préalablement faite avec le côté ventral du poisson orienté vers le haut. Abaissez doucement le transducteur à l’aide de la poignée du système ferroviaire en le plaçant longitudilement et fermez le côté ventral du poisson avec l’encoche du transducteur faisant face à l’opérateur.
Laissez deux à trois millimètres de dégagement du poisson. Ajustez la plate-forme par rapport au transducteur à l’aide du micromanipulateur dans les trois axes jusqu’à ce que le cœur du poisson soit visualisé. Immédiatement après avoir localisé le cœur, sélectionnez ou restez en mode B et réduisez le champ en zoomant pour regarder de plus près le cœur.
Si nécessaire, améliorez la qualité ou le contraste de l’image en fixant la plage dynamique à 45 à 50 décibels. Passez aux commandes du mode B dans l’option plus de contrôles et enregistrez ensuite le passage aux presets de mode. Le mode appuyez sur prérésets pour sélectionner le paramètre d’acquisition d’image optimisé à chaque fois avant de commencer à imager une nouvelle série.
Prenez autant d’images que vous le souhaitez dans le plan à long axe. Ensuite, passez à la couleur Doppler pour la détection et l’acquisition du flux sanguin. À l’aide de l’écran tactile, placez le quadrant au-dessus de la valve atrioventriculaire et localisez l’afflux qui se distingue par le signal de couleur rouge.
Réduisez la zone du quadrant autant que possible pour augmenter la fréquence d’image. Activez l’onde d’impulsion Doppler déplacer pour échantillonner la vitesse d’entrée de sang ventriculaire. Placez la porte de volume de l’échantillon au centre de la valve atrioventriculaire pour détecter la vitesse d’écoulement maximale.
Le signal de couleur rouge devient plus jaunâtre. Ajustez l’angle de l’onde d’impulsion sur l’écran à l’aide des doigts afin qu’il s’aligne avec la direction de l’afflux sanguin. Appuyez sur démarrer ou mettre à jour pour commencer à échantillonner la vitesse du sang qui s’écoule dans le ventricule.
Déterminez la vitesse de sortie en plaçant le quadrant Doppler de couleur à la jonction entre le ventricule et le bulbe et localisez le flux. Ceci se distingue par un signal de couleur bleue. Placez la porte de volume de l’échantillon juste avant la jonction du bulbe ventricule et ajustez la ligne de correction d’angle pour correspondre à la direction du flux sanguin.
Ajustez la ligne de base qui l’élève dans le panneau de vitesse d’écoulement afin de détecter et de tracer complètement les pics de signal. Dès que l’acquisition de l’image est terminée, utiliser une cuillère à café et transférer le poisson dans l’eau aérée système régulier exempt de tricaine et laisser le poisson récupérer. Pour aider à la récupération, gicler l’eau à plusieurs reprises sur les branchies à l’aide d’une pipette de transfert pour favoriser l’aération de l’eau et le transfert d’oxygène.
Il faut habituellement de 30 secondes à deux minutes pour reprendre le mouvement branchial et la natation. Ouvrez le logiciel d’analyse d’image. Sélectionnez une image et cliquez sur l’icône de traitement d’image.
Ajustez la luminosité et le contraste de l’image pour permettre une visualisation claire des parois ventriculaires ou du flux sanguin. À l’aide de l’image du mode B, ouvrez la liste de dropdown de l’option parasternal à long axe sur les mesures du paquet cardiaque. Sélectionnez la trace et tracez le mur intérieur ventriculaire à systole et diastole pour obtenir la zone ventriculaire dans le systole et le diastole et le volume diastolique et le volume systolique final.
Dans cette étude, les images en mode B ont permis de tracer le mur intérieur ventriculaire en systole et diastole et d’obtenir des données dimensionnelles telles que les dimensions de la chambre et du mur. Des données fonctionnelles ont également été obtenues telles que la fréquence cardiaque, le volume de course, et la sortie cardiaque aussi bien que des paramètres de fonction systolique ventriculaire comprenant le changement fractionnel de secteur et la fraction d’éjection. Les mesures au niveau de la valve atrioventriculaire à l’aide d’images de couleur en mode Doppler ont également fourni des vitesses d’afflux ventriculaires et de flux sanguin.
Basé sur l’image doppler d’onde d’impulsion, une valeur de fréquence cardiaque a été générée en traçant trois crêtes aortiques consécutives de flux. La chose la plus importante est de positionner correctement la plate-forme d’ultrasons et le poisson pour une imagerie précise et de minimiser l’exposition des poissons à la tricaine. D’autres méthodes pour soutenir cette procédure incluent l’électrocardiogramme de poisson pour la détection rapide du dysfonctionnement cardiaque comme des arythmies ou des méthodes d’histologie pour évaluer la structure de tissu cardiaque ou la mort cellulaire.
Ces techniques permettent d’évaluer la fonction cardiaque du poisson zèbre et d’établir un phénotype cardiaque dans les modèles de maladies cardiaques du poisson zèbre. Il permet également de tester de nouveaux médicaments, d’étudier les lésions cardiaques et la capacité régénérative. Tricaine MS-222 est un irritant pour la peau, les yeux et les voies respiratoires.
Lors de la préparation de la solution tricaine, l’équipement de protection doit inclure un masque antipoussière, un écran oculaire et des gants.
