在伊蚊中传播微孢子寄生虫Edhazardia aedis

Edhazardia aedis 是一种微孢子寄生虫，专门感染伊蚊。由于寄生虫的生命周期的复杂性，饲养这种寄生虫对新的研究人员来说可能具有挑战性。该协议为饲养E.aedis提供了分步指导，包括如何正确时间测量程序的步骤，识别传染性孢子，以及传播下一代寄生虫。

此协议的准确计时可能具有挑战性，可能需要一些试验和错误。识别孢子也可能很困难。此协议中的视觉辅助工具应提供帮助。

首先，孵化感染E.aedis的 A.aegypti 蛋，用一升去电化水将其放入幼虫饲养托盘中，并加入 50 毫克的鱼食。蚊子在27摄氏度和80%的相对湿度下，有14小时光，10小时黑暗循环。孵化后，将幼虫的密度降低至每托盘约100幼虫，使新的托盘。必要时。

在每个托盘中加入一块干猫粮。耗尽食物后补充食物，但不提供多余的食物。每三天吃一块200毫克的猫粮就足够了。

当受感染的幼虫是第三至第四星时，将未受感染的 A.aegypti 卵子孵化成一个新的托盘。以密度将蚊子后部，使健康的 A.aegypti 在 48 到 72 小时内达到第二至第三星。多日孵化一批健康卵子可以保证幼虫在需要的时候处于正确的阶段。

要收获和量化单核孢子，请使用转移移液器将10个受感染的第四个星体幼虫移动到1.5毫升微离心管。用转移移液器去除育种水，通过加入大约一毫升清洁的去ionde水清洗幼虫一次。去除洗涤水，在10个幼虫中加入500微升清洁脱水，并使用害虫和机械均质器将其均质化。

将 10 微升的均质在血细胞计上，以 400 倍的放大倍率量化孢子。混合1.2克肝粉、0.8克布鲁尔酵母和100毫升水，制作新鲜的幼虫食品浆料。将 100 秒至第三星健康 A.aegypti 幼虫转移到 150 毫升烧杯或标本杯中，并添加 5 倍 10 至 4 至 1 倍至第五孢子到每个杯子中加移液器。

加入两毫升幼虫食物泥浆和去维化水，最终体积为100毫升。12 至 24 小时后，将幼虫转移到饲养托盘中。添加食物，并把它们养大成。

监测被点幼虫的幼崽，将幼崽转移到笼子里的出现杯中。糖饲料成人 ad libitum 。根据 BEI 资源提供的标准协议为成人提供血液。

从用血喂养的成年人那里收集鸡蛋。E.aedis 的垂直传输在此步骤中发生。完成后，用 10% 漂白剂和高压灭灭清洁所有与 E.aedis 接触的材料，以防止污染。

该协议演示了在 A.aegypti 蚊子中传播 E.aedis 所需的完整程序。感染E.aedis的E.aegypti卵子被孵化，幼虫被饲养到第四个星期。在第四个星体阶段，可以观察到感染的视觉迹象，如在受感染的幼虫的脂肪体中出现白色孢子。

核糖孢子是在第四个星体幼虫中收获的，在500微升的去维化水中使10个幼虫均质化。这些孢子是皮里形的，在400倍的放大倍率下很容易看到。计算了每微升4，050个孢子的孢子，这些孢子被用来通过水平传播感染健康的幼虫。

在孵化后7天评估了25个孝感代幼虫的感染状态和E.aedis负载。发现孝感代E.aedis的垂直感染率为96%，孵化后7天感染者平均孢子负荷为3.31倍，为10至5。为了正确协调幼虫分期，建议考虑饲养时间中的一些变异性。

此外，孢子数迅速增加，因此如果您未检测到孢子，请第二天再试一次。祝你好运。