该方案可用于实时研究癌细胞侵入细胞外基质的机制。该技术的主要优点是，它使用一个简单的球形成像设备，这使得球形入侵检测更容易设置和提高其效率和成本。虽然我们演示使用球状入侵检测来模拟乳腺癌，但这种检测是将任何实体肿瘤侵入周围健康组织的绝佳模型。
隔间3D打印后，将基聚合物与塑料杯中的交叉链接器的10：1比重，并使用一次性移液器彻底混合杯中产生的PDMS溶液。将杯子放入真空室，快速释放真空压力，以清除困在混合物表面的任何空气，并消散剩余的气泡。在 100 摄氏度下孵化 3D 打印间隔器 5 分钟，以提高其灵活性，并清洁两个玻璃板，使用 100% 异丙酚。
将隔板放置在两个清洁的板之间，并在底部边缘放置两个大粘合器夹，将一个夹子放在上角，将模具密封在板的外部边缘。检查模具的顶部，以确保垫片与玻璃板齐平，并使用一次性移液器，从尖端切到缓慢但持续地将 PDMS 混合物添加到模具左上角。当整个模具被填充后，将模具放入真空室以去除已形成的任何气泡，然后在 100 摄氏度下固化 PDMS 一小时。
在孵化结束时，将霉菌放置在室温下。触摸冷却后，从装有固化 PDMS 的垫片中取出活页夹和玻璃板，并使用剃须刀刀片切开模具四面在隔板和玻璃板之间创建的密封件。拆开模具以显示隔板中的 PDMS 板材，并使用钳子小心地将 PDMS 板从垫片上剥离。
将纸张放在切割垫上，使用活检冲孔冲出直径为 17.5 毫米的 PDMS 光盘，然后将三个均匀分布的 5.5 毫米孔打入光盘。使用胶带去除每个插入物中的任何灰尘颗粒，并将清洁的插入物粘在一块双面胶带上。将胶带包裹在 10 厘米的 Petri 盘盖上，并将盖子与打开的 35 毫米玻璃底盘一起放入等离子机中。
在 300 毫托器处用一分钟的血浆处理激活插入物和玻璃，并使用钳子将每个插入物的处理侧快速连接到每个插入的经过处理的玻璃底盘的玻璃部分。应用完所有插件后，使用指尖和拇指对每个插入器施加均匀压力，同时旋转盘以将插件牢固地连接到菜肴上。当所有插入物都已固定后，在 60 摄氏度下孵育由此产生的球形成像设备 20 分钟，然后进行第二轮血浆处理。如图所示。
第二次处理后，在每个插入孔中加入 35 微升新鲜制备的涂层溶液。在室温下一小时后，取出涂层溶液，用蒸馏水冲洗设备三次。上次清洗后，在每个孔中加入 35 微升的交叉连接溶液，在室温下进行 30 分钟的孵化。
在孵化结束时，按照演示的蒸馏水冲洗设备三次，然后向每个设备灌装 70% 乙醇，在紫外线下孵育 30 分钟。灭菌结束时，用蒸馏水冲洗设备三次，为每个设备添加 2.5 毫升的存储溶液。要将球体嵌入胶原蛋白中，每次洗涤三毫升 PBS 会清洗设备三次。
最后一次清洗后，让设备完全干燥，然后在30微升新鲜制备的学院中加入一个球形，将一个溶液插入一个孔中，然后启动计时器。在确认孔中球体的存在后，如所示，在其他两个孔中添加球形。使用 10 微升移液器尖端来接近 PDMS 边界的任何球形，或在分配多个球体并停止定时器时分隔球体。
将球体垂直地围绕胶原蛋白层中枢，播种后，将设备倒置并孵育在 37 度，直到胶原蛋白聚合，每两分钟倒置一次设备方向，总共 30 分钟，然后每个设备添加 2.5 毫升中等值，并在零小时时间点获取球体图像。使用球形图像设备可促进胶原蛋白内或通过纵向成像对癌细胞入侵进行有效的嵌入和延时记录。虽然这个球体在六天内被纵向成像，需要细胞质和/或核荧光蛋白的稳定表达，但使用染料标签可以在更短的时间内进行类似的纵向成像。
球状物也可以固定和免疫带。例如，这些球形被免疫接种为上皮卡德林，皮质素和F-actin。在这些图像中，可以观察到使用斐济宏测量球体区域的图像处理过程的分步图。
请务必将单个球体分配到球形成像设备的每个孔中，并将球体放置在孔的中心，同时朝 XY 和 Z 方向。通过更改孔、插入物和玻璃底盘的大小和排列，可轻松修改设备设计，以适应更高的球形吞吐量。
