称为 LISCA 的单细胞阵列的活细胞成像也是数百个单个单元的荧光时间课程的自动读取。该方法的优点是，在相同的微环境中，从空间分离的细胞记录单个细胞反应，从而进行高效的排放分析，并具有出色的统计学。要制作单细胞阵列，请使用手术刀从 PDM 层中剪下包含六条微粉条的单个 PDM 杰作，并将杰作放在实验室长凳上，微型图案朝上。
使用剃须刀刀片将六条微图案条纹中的每一个剪切成 PDM 印章，切断一些图案区域，以确保邮票的边缘是开放的。接下来，小心地划伤六室滑梯盖滑梯的保护箔，以标记滑梯的通道位置，并将盖片放在长凳上，保护箔朝下。使用钳子将邮票放在标记通道位置的盖单上，微型图案朝下，并在显微镜下检查邮票的附件。
与幻灯片接触的正方形将显得比间空暗。图案质量因未正确连接到幻灯片的方块而降低。如果邮票有安全连接处理封面单和邮票与氧气等离子体在0.2毫巴的压力和约40瓦三分钟，使表面之间的PDM邮票和封面滑亲水。
在等离子体清洁结束时，将盖子滑入生物安全柜中，并在每个邮票上加入 15 微升的聚赖氨酸溶液，以便溶液被吸收到邮票的亲水图案中。20分钟后，用一毫升超纯水冲洗邮票。使用钳子从滑梯上取下邮票，用第二毫升的超纯水第二次冲洗盖滑。
当盖滑完全干燥时，在盖滑上附加一个六通道粘滑梯，注意微图案区域与通道底部对齐。并在每个通道中添加 40 微升 PBS 和 40 微升纤维素溶液。要混合两种溶液，从一个储层中取出 40 微升，并将其添加到同一通道的对面储层三次，以生成同质溶液。
当所有通道都混合后，在室温下孵化幻灯片 45 分钟，然后用每次洗涤 120 微升 PBS 对每个通道进行三次清洗。将PBS换到37摄氏度，通过在一个储层中加入120微升中等，完全补充通道中的细胞生长介质，并将其从对面的储层中取出。向每个通道添加每毫升细胞40万个细胞的40微升和40微升的细胞生长介质，并将细胞溶液与介质混合以示。
混合后，从每个通道中取出 40 微升悬浮器，使只有通道充满细胞悬浮，并将滑梯放入细胞培养孵化器中。一小时后，通过相位对比显微镜检查细胞粘附，并在每个通道中加入120微升37摄氏度细胞生长介质，然后将幻灯片返回细胞培养孵化器3个多小时。要设置灌注系统，请将装有 37 摄氏度细胞生长介质的一毫升注射器连接到系统的入口管，并使用阀门为管子填充中等。
将入口管连接到一个通道的储液管，注意没有气泡被夹住，并将一个串行连接器连接到当前通道入口管对面的储液管。连接所展示的其他通道，直到所需的频道数以系列方式连接。并将出水管直接连接到最后通道的免费储液池。
然后用介质填充连接的管子，以确认灌注系统不会泄漏。对于细胞的延时成像，设置用于记录相对比图像和荧光图像的延时协议，为相位对比成像和荧光成像设置光学配置。使用 10 倍目标、适当的荧光滤光过滤器和自动对焦校正系统，以确保长期测量的图像质量更好。
选择 10 毫秒的光照时间进行相对比成像，选择 750 毫秒的曝光时间记录 EGFP 荧光强度。设置时间安排，在通过位置列表的连续循环和 30 小时的观察时间之间间隔为 10 分钟。接下来，将六个通道滑动在显微镜37摄氏度加热室的样品架上，将灌注系统管带上舞台。
将出口管的免费端插入 15 毫升圆锥管中，以收集液体废物。并设置扫描时间推移测量的位置列表，注意在通过位置列表的连续循环之间的定义时间间隔内扫描位置数。然后开始时间推移测量。
对于带有荧光标记的细胞的传输，使用注射器用 1 毫升 37 摄氏度 PBS 冲洗管系统，注意显微镜阶段不会移动。冲洗后，在系统中填充300微升血清，辅以感兴趣的mRNA，最终浓度为每微升0.5毫微克的mRNA，并允许脂质孵育一小时。在孵化结束时，用一毫升37摄氏度的完整细胞生长介质冲洗系统，以去除任何未绑定的mRNA。
在分析结束时，查看通道菜单中列出的通道，并滚动浏览时间范围，以检查预选的单元及其集成的荧光信号。单击感兴趣的单元格以突出显示其荧光时间过程，或单击时间课程以查找相应的单元格。在单击单元格以选择或取消选择时按移位。
去选择任何不可行或不局限于粘附点或连接到另一个细胞的细胞，以排除它们进一步分析。当所有细胞都被正确选择或取消选择时，将细胞区域的单个细胞时间课程和集成荧光保存在适当的目录中。为了量化转化后的翻译发病时间以及细胞EGFP表达的强度，可以采用三阶段翻译模型。
EGFP 的模型解决方案可以安装到单个单元格时间课程中，如图所示。在这里，可以观察到翻译发病时间的直方图和脂质转染细胞的表达速率。由于每个细胞都估计了这两个参数，因此可以按照散射图中所示分析这些参数的相关性，并与与脂质纳米粒子传播的细胞进行比较。
如图所示，与与脂质颗粒转化的细胞相比，与脂质纳米粒子转化的细胞相比，细胞对细胞的变异性较小。人口平均值显示翻译的开始速度更快，表达率也更高。我们的方法也可以适应替代的微模式方法。
对于 LISCA 来说，最重要的是良好的单元禁闭和自动化图像分析与方便的用户监控相结合。正如你所看到的，细胞行为是异质的。单细胞时间推移电影为固有的生化网络提供了公正动态的访问。
例如，在绿色表达中，凋亡或细胞杀死检测。
