这个程序的总体目标是分离斑马鱼卵巢卵泡中的卵泡细胞和卵母细胞。卵泡是卵巢的基本单位,由卵母细胞和周围的卵泡细胞组成。它是分离卵泡细胞和外部隔间的宽工具,用于良好的研究策略,包括毛囊细胞的初级捕获和基因表达的上升,所有饱和和体外受精。
最近,斑马鱼已成为日产的强大模式,研究已经发展的控制。在这里,我们提出了一个简单的方法,所以分离斑马鱼卵泡的卵泡细胞和卵母细胞,这将促进调查斑马鱼已经发展的商业,没有质量或两个分离的卵泡细胞和旋转的四面都使用后,有一个迷宫,耗时,对外部有很高的损害。在这里,我们已经建立了一个简单的方法,两个单独的隔间使用或部分眼镜塔梅拉率下的纯礁石。
我们的地铁范围,无论是外部和卵泡细胞可以很容易地通过键入拉玻璃毛细管。首先,准备一个诗人玻璃毛细。击中酒精燃烧器上的玻璃毛细的头部。
使用四面将玻璃毛细拉伸到狂欢卡直径。其次,从成年雌鱼身上去除过度,将卵巢卵泡从卵巢中分离。最后使用经过调查的玻璃毛细管将卵泡细胞和卵母细胞从卵巢卵泡中分离。
准备玻璃毛细管、锋利容器、充足的切割机、酒精燃烧器和钳子。躺在酒精燃烧器上,带回家一杯毛细,在酒精燃烧器的火焰上加热玻璃毛细的一端。使用钳子保持玻璃毛细细的另一端,快速轻轻地强调玻璃毛细。
将玻璃废物放入锐器容器中。用玻璃杯在游泳池上使用充足的切割机。然后由钳子轻轻折断,使端口顺利打开,快速将酒精燃烧器上的玻璃毛细管末端燃烧数次,并小心地用充足的切割机擦开开端。
以养殖水系统的鱼缸为例。现在,通过在冰水上放鱼至少两到五分钟,直到鱼停止吉尔运动,将成年雌性与成年雌性联系在一起。从冰盒中取出鱼,用毛巾取出剩余的水鱼体,用四套在D节板上放一条鱼。
鱼被斩首,用锋利的剪刀服务斯潘和弦,以确保死亡。使用解剖剪刀切割如下。从克洛伊切到腹部中线的刺,从克洛伊的岸边切开,从前尖切到后侧。
轻轻地去除身体一侧的皮肤和肌肉,暴露内脏器官,并采取健康的整个卵巢与四个步骤。卵巢被轻轻地放置在100毫米的文化,菜容器60%L 50中位数。根据不同阶段卵巢卵泡的大小和形态,用传输的光光学设备发送解剖显微镜。
使用四组啤酒手动分离这些卵巢卵泡。收集分离的卵巢卵泡,并把它们放在另一个培养皿中,含有60%L 50中等,漂亮的分离卵巢卵泡将用于分离卵泡细胞和卵母细胞。然后设置分离设备。
使用30厘米的塑料管。一端与带有过滤器元件的一毫升移液器尖端相连。另一端与 200 微升移液器尖端相连。
在解剖显微镜下,用嘴控制气流,让故障用玻璃毛细管移动到池中,然后吹出玻璃毛细管的愚蠢。在这个过程中,卵巢卵泡的卵泡细胞和卵母细胞可以分离。这是一个成熟阶段卵泡的分离过程。
在吸入过程中,卵泡细胞层与卵母细胞分离,吹出卵泡细胞后可以分离卵泡细胞和卵母细胞。这是一个完整的地面阶段毛囊。我们可以看到卵泡细胞层与卵母细胞分离。
这种方法也可以应用于卵巢卵泡的早期阶段。这是中拉拉创世纪阶段的卵泡。这是早期瓦泰拉创世纪阶段的毛囊。
这是瓦塔拉前创世记阶段的卵泡。从这张照片中,你可以看到分离的过程。面板一显示一个完好无损的毛囊在完全生长的舞台面板。
面板二显示这个毛囊的焦虑到拉玻璃毛细血管。第三组显示卵泡被从拉玻璃毛细管中吹出。第四组表示成功分离F凹陷卵母细胞和卵泡细胞。
即使这种方法,卵母细胞的卵泡细胞分离也可以在不同阶段的卵泡上进行。调查卵泡细胞是否与完整的卵泡分离。从BV阶段到FG阶段,卵泡和卵泡从不同阶段分离出卵母细胞,并染上DAPI。
卵泡细胞的细胞核可以通过DAPI染色。DAPI的蓝色信号在完整的卵泡中观察到,但这些不同阶段的卵泡没有凹陷的卵母细胞。为了进一步确认明显的分离,完整的卵泡和分离的卵母细胞正在向组虫学部分内脏。
DAPI陈述结果表明,卵泡细胞被明确去除并凹陷卵母细胞。使用这种方法,从完全生长的阶段卵泡分离的凹陷卵母细胞被发现接受自发的卵母细胞成熟。四个小时孵化后没有任何治疗。
通过水激活后,这些成熟的卵母细胞可以经历完全的胆汁膨胀。此结果表示使用此方法对卵母细胞的伤害较低。因此,这种芥末可以用来获得斑马鱼的卵母细胞,用于研究斑马鱼的卵母细胞成熟配给。
毛囊中的毛囊层材料可以通过毛细血管玻璃管去除。这些可以受精并转移到孵化阶段。结果表明,这种方法可用于斑马鱼的体外受精。
我们在这里描述了一种新的方法,快速和容易地分离卵泡细胞和卵母细胞斑马鱼卵巢卵泡。这种方法有几个显著的优势,推翻了方法。其中最主要的是大大提高分离的便利性,因为只需要一个单一的外部操作。
分离的便利性增加,增加了这些不擅长微分的研究人员使用这种方法的机会。其次,这种方法可用于分离卵巢卵泡的卵泡细胞和卵母细胞及早期发育阶段,包括光伏、EBV MV阶段,这种分离不能在早期卵泡阶段使用目前的方法进行。第三,这种新方法对卵母细胞的损害较小。
通过这种方法分离的凹陷卵母细胞可以经历卵母细胞成熟,并可以受精。此外,这种方法也可以应用于其他鱼类。