L’objectif global de cette procédure est de séparer les cellules folliculaires et les ovocytes dans le folliculaire ovarien du poisson zèbre. Le folliculaire est l’unité de base de l’ovaire, qui se compose des ovocytes et des cellules folliculaires environnantes. C’est l’outil large pour séparer la cellule folliculaire et les compartiments extérieurs pour des politiques de bien-recherche comprenant la capture primaire des cellules folliculaires et augmente sur l’expression de gène, toute saturation et fertilisation in vitro.
Récemment, le Zebrafish est devenu un modèle puissant de Nissan, qui étudie un contrôle du développement déjà. Ici, nous présentons une méthode simple, sépare ainsi les cellules folliculaires et les ovocytes du folliculaire zebrafish qui facilitera les investigations de déjà développement dans Zebrafish La publicité, pas de masse ou les deux sépare sur les cellules folliculaires et tous les côtés des spins le sont en utilisant le poteau qui a un labyrinthe, long et a eu des dommages élevés à l’extérieur. Ici, nous avons établi une méthode simple à deux compartiments séparés en utilisant ou en partie verres Tamela taux sous un récif pur.
Notre portée metro, à la fois à l’extérieur et les cellules folliculaires peuvent être facilement fabriqués en tapant le capillaire en verre tiré. Tout d’abord, préparer un poète capillaire en verre. Frappez la tête du capillaire de verre sur le brûleur d’alcool.
Utilisez un quatre côtés pour étirer le capillaire en verre au diamètre de la carte rave. Deuxièmement, desect que overate du poisson femelle adulte, isoler les follicules ovariens de l’ovaire. Enfin utiliser un capillaire en verre sondé pour séparer la cellule folliculaire et l’ovocyte des follicules ovariens.
Préparer le récipient capillaire en verre, les aigus, le coupeur ample, le brûleur d’alcool et les forceps. Allongez le brûleur d’alcool, prenez à la maison un verre de capillaire et chauffez une extrémité du capillaire de verre sur le feu du brûleur d’alcool. Utilisez un forceps pour tenir une autre extrémité du capillaire en verre, stressez le capillaire en verre rapidement et doucement.
Mettez les déchets de verre dans le contenant de pointes. Utilisez le gretch amplement coupeur sur la piscine avec du verre. Puis rompre par les forceps Doucement pour faire une ouverture lisse du regard bâbord rapidement brûler l’extrémité du capillaire en verre sur brûleur d’alcool à plusieurs reprises et frotter l’extrémité ouverte par coupeur amplement soigneusement.
Prenez comment le réservoir de poissons du système d’eau cultivée. Et maintenant, les femelles adultes attachent en plaçant les poissons sur l’eau glacée pendant au moins deux à cinq minutes jusqu’à ce que les poissons arrêtent le mouvement gill. Sortez le poisson de la glacie et retirez le reste du corps de poisson d’eau par serviette, placez un poisson sur la plaque de section D avec quatre ensembles.
Les poissons ont été décapités en servant l’accord spang à l’aide de leurs ciseaux pointus pour assurer la mort. Utilisez des ciseaux disséquants pour couper comme suit. Disséquer de la coupe Chloé aux branchies le long de la ligne médiane de l’abdomen, coupé de la banque de la Chloé, coupé de la pointe antérieure au côté dorsal.
Doucement enlevé la peau et les muscles d’un côté du corps, exposer les organes internes et prendre des ovaires entiers en bonne santé avec quatre étapes. Les ovaires ont été doucement placés immédiatement dans le 100 millimètres dans la culture, récipient à vaisselle 60%L 50 médiane. Envoyé un microscope disséquant avec optique de lumière transmise basée sur la taille et la morphologie des follicules ovariens de différents stades.
Isolez ces follicules ovariens manuellement à l’aide d’une bière de quatre ensembles en lice. Recueillir les follicules ovariens isolés et les mettre dans un autre plat cultivé contenant 60%L 50 moyenne, follicules ovariens isolés nice sera utilisé pour séparer les cellules folliculaires et les ovocytes. Réglez ensuite un dispositif de séparation.
Utilisez un tube en plastique de 30 centimètres. Une extrémité est reliée à une pointe de pipette d’un millilitre avec un élément filtrant. Une autre extrémité est reliée à une pointe de pipette de 200 microlitres.
Sous le microscope disecting, utiliser la bouche pour contrôler le flux d’air pour laisser le défectueux va se déplacer à la piscine avec capillaire en verre, puis souffler la folie sort du capillaire en verre. Au cours de ce processus, les cellules folliculaires et les ovocytes des follicules ovariens peuvent être séparés. Il s’agit d’un processus de séparation pour un follicule mature stade.
Pendant le processus d’inhalation, la couche folliculaire de cellules est détachée de l’ovocyte, fait après souffler la cellule folliculaire et l’ovocyte peut être séparé. Il s’agit d’un follicule étape plein sol. Nous pouvons voir que la couche folliculaire des cellules est détachée de l’ovocyte.
Cette méthode peut également être appliquée dans les follicules ovariens à un stade précoce. Il s’agit d’un follicule au stade latella genesis moyen. Il s’agit d’un follicule au stade précoce de vatella Genesis.
Il s’agit d’un follicule à un stade pré-vatalla Genèse. À partir de cette image, vous pouvez voir le processus de séparation. Le panneau 1 montre un follicule intact au panneau de scène adulte.
Le panneau deux montre l’angulation de ce follicule dans le capillaire en verre tiré. Le panneau trois montre que le folliculaire a été soufflé du capillaire en verre tiré. Le panneau quatre indique la séparation réussie F denuded Oocyte et cellule folliculaire.
Même cette méthode, la séparation de la cellule folliculaire dans l’ovocyte peut être effectuée à différents follicules de stade. Étudiez si les cellules folliculaires ont été séparées des follicules intacts. Intact un follicule et est séparé Oocyte de différents stades des follicules du stade BV au stade FG ont été tachés avec DAPI.
Le noyau des cellules folliculaires peut être taché par DAPI. Le signal bleu de DAPI a été observé dans les follicules intacts mais pas les ovocytes dénudés à ces follicules différents d’étape. Pour confirmer davantage la séparation claire, les follicules intacts et les ovocytes séparés éviscérés aux sections histologiques.
Dapi indiquant des résultats a prouvé que les cellules folliculaires ont été clairement enlevées et ont dénudé des ovocytes. Utilisant cette méthode, les ovocytes dénudés séparés des follicules adultes pleins de stade se sont trouvés pour subir la maturation spontanée d’ovocyte. sans aucun traitement après quatre heures d’incubation.
Après activation par l’eau, ces ovocytes mûris peuvent subir l’expansion complète de chorion. Ce résultat indique les faibles dommages à l’ovocyte en utilisant cette méthode. Ainsi, cette moutarde peut être utilisée pour obtenir l’ovocyte dénudé pour étudier la ration mûrie des ovocytes des poissons zèbres.
La couche folliculaire du matériau aux follicules peut être enlevée par un tube en verre capillaire. Ceux-ci peuvent être fertilisés et déléguer dans le stade d’éclosion. Les résultats suggèrent que cette méthode peut être utilisée pour la fécondation in vitro chez les poissons zèbres.
Nous décrivons ici une nouvelle méthode pour la séparation rapide et facile de la cellule folliculaire et de l’ovocyte des follicules ovariens de poisson zèbre. Cette méthode présente plusieurs avantages significatifs, des méthodologies renversées. La principale d’entre elles est d’accroître considérablement la facilité de séparation, car une seule manipulation externe et unique est nécessaire.
La facilité accrue de séparation augmente la disponibilité de cette méthode pour les chercheurs qui ne sont pas qualifiés en microdissection. Deuxièmement, cette méthode peut être utilisée pour séparer la cellule folliculaire et l’ovocyte des follicules ovariens et des stades développementaux précoces, y compris pv, stade EBV MV, une telle séparation ne peut pas être effectuée au follicule au stade précoce en utilisant les méthodologies actuelles. Troisièmement, cette nouvelle méthode entraîne moins de dommages aux ovocytes.
Les ovocytes dénudés séparés par cette méthode peuvent subir la maturation des ovocytes et peuvent être fécondés. En outre, cette méthode peut également être appliquée chez d’autres poissons.
