本协议描述了成功中子自旋回波研究与生物功能相关的集体膜波动和脂膜的实际应用所需的样品制备和数据减少。NSE 直接访问关键膜功能纳米秒时间尺度上的膜动力学，具有同位素灵敏度的独特优势，用于探测其他技术无法访问的选择性膜特征。研究纳米尺度上的膜动力学对于了解分子机制的基础膜特性和与各种细胞病理有关的膜蛋白相互作用至关重要。
该方法为新到 NSE 的研究人员提供了有关设计、制备和描述脂质囊泡以进行成功实验以及随后的数据减少分析和解释的详细指南。演示程序的将是特沙尼·库马拉奇和朱莉·吴，一个研究生和一个来自实验室的本科生。在发动机罩内工作，通过将精确称重的脂质溶解在一毫升溶剂中，并配手混合，准备脂质悬浮。
通过在小瓶中轻轻流式传输惰性气体，同时以一个角度缓慢旋转来干燥脂质溶液。要彻底去除残留溶剂，请将小瓶在 35 摄氏度的真空烤箱中过夜。第二天，用两毫升重水将脂质薄膜浇合，获得每毫升50毫克的脂质浓度，并涡旋水脂悬浮，直到脂质膜完全溶解。
接下来，通过将水合脂悬浮液瓶储存在零下 80 摄氏度，直到冷冻，执行五次冷冻- 解冻循环。然后将其转移到35摄氏度的水浴中解冻脂质悬浮液。漩涡解冻悬浮，直到同质，然后再进入下一个周期。
在开始实验之前，使用两个膜支架之间的多碳酸酯膜组装挤出器设置，并在两侧添加两个纸过滤器以提供额外的支持。使用密封玻璃注射器通过几次通过膜组装将 0.3 毫升重水传递，从而为聚碳酸酯膜提供水合。在保湿膜后，将一个一毫升的气密注射器与预制的乳白色脂质溶液插入一端，将一个空注射器插入挤出器装置的另一端。
连接注射器后，将装配件放入挤出器块中。通过按住速率按钮进入挤出速率并按下直径按钮进入注射器直径来编程泵。然后，按退出，直到灯打开。
按启动并等待样品开始分配到空注射器中。在样品注射器完全空之前，点击停止按钮。记录分配的音量，然后按住"速率"按钮，直到第一阶段出现在屏幕上。
保持取光灯，按音量按钮以输入之前记录的分配音量。再次按下"速率"按钮，并使用右上箭头访问第二阶段。按量输入之前记录的分配卷的相同值。
在此阶段，按下"退出"按钮，直到取款灯亮起。按下音量按钮，将第三阶段的周期重复，直到 LP:SE 出现在屏幕上并将其设置为 20。最后，按下速率按钮，访问第四阶段，并按下音量按钮以达到停止功能以完成泵设置。
泵编程后，按"开始"开始挤出循环。执行 15 到 20 个挤出周期，然后在干净的小瓶中收集透明蛋白蓝挤压脂质悬浮物进行测量。打开 DAVE 软件，从数据减少菜单中选择减少 NSE 数据。
使用文件菜单上的开放回声文件将数据文件上传到不同的 Q 值上。上传的文件将显示在可用的数据集下。右键单击选定的文件，并根据它对应的测量结果（如示例、单元格或分辨率）标记它。
使用数据集选项卡，将探测器像素分组为 2 X 2，以提高信号与噪声比。将相同的装箱应用到分辨率、单元格和示例的所有文件中。通过按键盘上的 End 键检查所有像素组的数据，并屏蔽那些信号较差的数据。
按"输入"以访问弹出窗口，以便将相同的面罩应用到所有四个时间。蒙面像素将变绿。确保收集的数据以回声信号的形式出现。
开始安装从上传的文件列表的分辨率文件，通过右键单击所需的文件，并从弹出菜单中选择适合操作，适合回声分辨率。确保回声信号的拟合产生合理的拟合参数。要检查整个探测器上每个拟合参数相关的错误，请选择图像选项，然后选择感兴趣的拟合参数。
然后，右键单击探测器图像以访问显示错误条图的弹出窗口。如果对特定像素的拟合不满意，则通过选择该像素、按下拟合选项卡然后按"适合像素"来重新安装该像素上的信号。在"拟合"选项卡中输入新的起始参数，用于相位和周期。
通过从上传和标记的文件列表中选择相应的文件来减少样本文件。检查所有像素并掩盖上面描述的不良像素。然后，右键单击文件并选择适合操作、导入阶段。
对于分辨率文件，将之前描述的回波信号与期间值不变，从分辨率导入的回波相点相适合。通过访问一般选项卡并输入从实验中记录的 X 和 Y 光束中心值，输入所有数据文件的光束中心。安装完成后，通过从安装文件列表中直接单击所需的示例文件并从弹出式菜单中选择 Q 计算 I 来计算规范化的中间散射功能。
输入分辨率和单元格文件所需的信息以及弹出窗口中的 Q 弧数，然后按 OK 查看结果。请注意，青色中的数据显示由于探测器边缘效应而发出的信号较差，在编译不同的 Q 数据集时应予以消除。最后，将减少的数据集保存为 ASCII 文件，并将整个会话保存为所需文件夹中的 DAVE 项目。
在这项研究中，对用不同的去质方案制备的脂质样本进行了NSE测量。对完全对比的脂质体进行膜弯曲波动的 NSE 测量。这种去质方案使膜芯与去质流体环境之间存在较大的散射长度差异，显著提高了脂膜的散射信号，并改善了弯曲动力学的测量统计。
另一方面，NSE对脂质体膜厚度波动的测量显示，相对于Q的偏差，与弯曲波动的第三依赖性相对。为了隔离厚度波动信号，获得的信号除以Q到第三，多余的动态在Q中安装到洛伦茨函数上。 这种方法取决于高质量的数据，通过高浓度和强散射信号样本更易实现。NSE探测的动力学可以通过NMR放松测量和分子动力学模拟协同探索，以说明分子脂质结构和包装图案如何影响膜功能。
NSE脂膜研究揭示了膜生物物理学、膜结构和动力学的复杂关系，以及它们如何影响膜功能和膜蛋白相互作用。
