开发用于快速定量检测小分子化合物的横向流动免疫色谱带

该过程描述了胶体黄金的制备和免疫色谱条的组装。首先，氯酸和柠檬酸钠用于胶体金的合成。柠檬酸钠被添加到氯酸溶液中，煮沸后获得具有适当颗粒大小的胶体金。

合成，胶体黄金抗体结合。离心后，胶体金颗粒溶解在适当的溶液中，然后重新悬念以获得胶体金溶液。将玻璃纤维膜浸入结合中，以准备结合垫。

将人造抗原和二次抗体作为T线和C线滴在NC膜上。将数控膜、吸水膜、样品垫和玻璃纤维膜分别连接到PVC板中。将组装好的纸板切成3.5毫米宽的条状。

分别合成全%金氯酸溶液和1%柠檬酸钠溶液。打开磁搅拌器，将烧瓶放在搅拌机上。将120毫升蒸馏水加入圆底烧瓶中，加热至恒温磁搅拌器上沸腾。

继续煮沸，快速加入0.5毫升全%氯酸和5毫升1%柠檬酸钠。继续加热5至10分钟。观察溶液的颜色从淡黄色变为葡萄酒红色。

关闭恒温磁性搅拌机的功率，冷却到室温，并将混合物放入干净的瓶子中。储存在四摄氏度。金纳米粒子显示了廷德尔效应。

金纳米粒子的大小和形态是由紫外线光谱和传输电子显微镜成像决定的。在八根管子中加入100微升氯化钠溶液。使用每升碳酸钾 0.1 摩尔将胶体黄金溶液调整为 pH 5 至 12。

在含有氯化钠的8个管子中加入100微升胶体金溶液。混合几分钟后站立。观察每个管溶液的颜色变化，并记录保持红色的管子。

选择附加碳酸钾含量最低、溶液颜色稳定的pH值作为准备结合的最佳pH值。适应了相同的方法。观察颜色变化并记录保持红色的管子。

选择 MAB 浓度最低且溶液颜色稳定的抗体量作为最佳 mAB 量。采用10毫升胶体金溶液，每升碳酸钾使用0.1摩尔来调整溶液，以达到最佳pH值。慢慢加入具有适当浓度的 SSd mAB，并在室温下摇动 30 分钟。

在 2000 RPM 下将混合物离心 20 分钟，在 4 摄氏度。去除沉淀胶体金中含有杂质的沉淀物。将混合物以 10，000 RPM 离心，时间为 40 分钟。

丢弃超高纳特。沉淀物是胶体金 mAB 结合体。加入三聚盐酸、BSA、Tween 20 和 PEG 20，000，然后混合好，准备重新悬浮缓冲。

添加悬浮缓冲器并分离沉淀物。膜材料条，包括玻璃纤维素膜、聚酯纤维素膜和PVC板。膜材料，需要通过无菌显微镜跟踪和评估，以摆脱不孕不育。

首先，将 NC 膜放在 PVC 板上，距离板末端边缘两厘米。其次，在离上缘两厘米的数控膜上每毫升下降两毫克，作为测试线，在离下边缘两厘米的数控膜上每毫升金抗鼠IgG下降1.5毫克，作为控制线。将吸水垫连接到 NC 膜上方的 PVC 板上，并与 NC 膜重叠两毫米。

将玻璃纤维膜修剪到五厘米长，两厘米宽，用作结合垫。将玻璃纤维膜浸入金纳米粒子 mAB 结合溶液中。浸泡一段时间，使金纳米粒子mAB吸收。

在 37 度下干燥孵化器中的宽膜。将经过预处理的结合垫粘贴在 NC 膜下，与 NC 膜的重叠长度应为 0.1 厘米。将 Fusion3 膜修剪成 1.8 厘米长、3.5 厘米宽，用作示例垫。

然后，将样品垫放在PVC板上，并与结合垫重叠两毫米。使用切割机将纸板切割成 3.5 毫米宽的条状，并使用批量层压系统进行紧凑。最后，将测试条放入外壳中。

将它们密封在装有干燥剂的铝箔袋中，并存放在远离光线的地方。ICS 现已组装完毕。将 50 微升样品溶液滴入样品孔以观察色谱过程。

接下来，使用便携式条读卡器分析条带。机器可以提供测试线与控制线的比例。评估 ICS 测试的特异性、灵敏度、可重复性和稳定性。

阅读了准备好的胶体黄金溶液。传输电子显微镜分析显示，这些粒子呈多面体形状，均匀分布，平均直径为14纳米。高分辨率传输电子显微镜图像显示了一个连续的边缘模式，间距为0.117纳米的金纳米粒子。

紫外线可见吸收表明，通过改变柠檬酸钠和氯酸的比例，可以获得不同大小的胶体金颗粒。在定量实验中，使用便携式ICS读卡器扫描带有赛科萨波宁D测试结果的条带。我们计算了一个标准曲线，将赛科萨波宁D的非浓度与每个浓度的相应吸收联系起来。

方法研究后，可应用于小分子化合物的定量和半定性检测。此过程包括胶体金的制备、金纳米粒子 mAB 结合的合成、条带的组装和方法研究。这项工作为开发用于快速定量检测小分子的免疫色谱条提供了详细的协议。

看完这段视频后，希望大家对免疫色谱带的准备有一个良好的理解。感谢您的观看和您的实验好运。