절차는 콜로이드 금의 준비와 면역 크로마토그래피 스트립의 조립을 설명합니다. 첫째, 클로로우릭산과 구연산 나트륨은 콜로이드 금의 합성에 사용하였다. 구연산 나트륨을 클로로우릭 산 용액에 첨가하고 적절한 입자 크기로 콜로이드 금을 얻기 위해 삶아졌습니다.
합성, 콜로이드 골드 항체 공주. 원심분리 후 콜로이드 금 입자는 적절한 용액으로 용해된 다음 콜로이드 골드 용액을 얻기 위해 다시 중단되었습니다. 유리 섬유 멤브레인을 컨쥬게이트 패드를 준비하기 위해 유리 섬유 멤브레인을 컨쥬에침한다.
T 라인과 C 라인으로 NC 막에 인공 항원 및 이차 항체를 떨어 뜨립니다. NC 멤브레인, 흡수막, 샘플 패드 및 유리 섬유 멤브레인을 각각 PVC 보드에 부착합니다. 조립된 종이 보드를 3.5밀리미터 너비스트립으로 자른다.
결선불금 염산 용액과 1% 구연산 용액을 각각 1% 마그네틱 교반기를 켜고 플라스크를 믹서에 놓습니다. 120 밀리리터 증류수를 둥근 바닥 플라스크에 넣고 가열하여 온도성 자기 교반기에서 끓입니다.
끓는 것을 유지하고 0.5 밀리리터를 전체 퍼센트 클로로우릭 산과 1 % 나트륨 구연산의 5 밀리리터를 추가하십시오. 5~10분간 계속 가열합니다. 옅은 노란색에서 와인 레드로 변경 되는 솔루션의 색상을 관찰 합니다.
온도 조절 성 자기 믹서의 힘을 끄고 실온으로 냉각시키고 혼합물을 깨끗한 병에 넣습니다. 4 센티미터에 저장합니다. 금 나노 입자는 Tyndall 효과를 보여줍니다.
금 나노 입자의 크기와 형태는 자외선 분광법 및 전송 전자 현미경 이미징에 의해 결정되었다. 8개의 튜브에 100개의 마이크로리터 염화나트륨 용액을 추가합니다. 코로이드 골드 솔루션을 리터당 0.1 mol을 사용하여 pH 5 ~ 12로 조정합니다.
염화 나트륨을 함유한 8개의 튜브에 콜로이드 골드 용액 100마이크로리터를 추가합니다. 블렌딩 후 몇 분 동안 포스트를 위해 서 있습니다. 각 튜브 용액의 색상 변화를 관찰하고 빨간색으로 남아있는 튜브를 기록합니다.
탄산칼륨의 가장 낮은 양과 안정적인 용액 색을 컨쥬게이트를 준비하기 위한 최적의 pH 값으로 pH 값을 선택한다. 동일한 접근 방식을 적용했습니다. 색상 변화를 관찰하고 빨간색으로 남아있는 튜브를 기록합니다.
최적의 mAB 양으로 mAB의 가장 낮은 농도와 안정적인 용액 색으로 항체 양을 선택한다. 10 밀리리터 콜로이드 골드 용액을 복용하고 탄산칼륨 당 0.1 mol을 사용하여 최적의 pH 값으로 용액을 조정하십시오. SSd mAB를 적절한 농도로 천천히 추가하고 실온에서 30 분 동안 흔들어줍니다.
2000 RPM에서 혼합물을 4센티미터에서 20분 동안 원심분리합니다. 침전된 콜로이드 골드의 불순물을 함유한 침전물을 제거합니다. 10, 000 RPM에서 40분 동안 혼합물을 원심분리합니다.
상부체를 폐기합니다. 침전은 콜로이드 골드 mAB 컨쥬게이트입니다. 트리스 염산, BSA, 트위엔 20 및 PEG 20, 000을 추가한 다음 잘 혼합하여 재서스펜션 버퍼를 준비합니다.
재서스펜션 버퍼를 추가하고 침전을 분리합니다. 유리 셀룰로오스 멤브레인, 폴리에스테르 셀룰로오스 멤브레인 및 PVC 보드를 포함하는 멤브레인 재료 스트립. 멤브레인 물질은 불균일성을 제거하기 위해 멸균 현미경으로 추적하고 평가해야합니다.
먼저, NC 멤브레인을 PVC 보드에 2센티미터 를 보드 의 단면 끝의 가장자리에서 놓습니다. 둘째, NC 멤브레인에 밀리리터 SSd-BSA당 2밀리그램을 테스트 라인으로 상층부에서 2센티미터 로 떨어뜨리고 NC 멤브레인에 밀리리터 골드 안티마우스 IgG당 1.5밀리그램을 제어 라인으로 하부 가장자리에서 2cm 떨어진다. 흡수 패드를 NC 멤브레인 위의 PVC 시트에 부착하고 NC 멤브레인과 2 밀리미터 겹칩니다.
유리 섬유 멤브레인을 길이 5cm, 너비 2cm로 다듬고 컨쥬게이트 패드로 사용하십시오. 유리 섬유 막을 금 나노입자 mAB 컨쥬게이트 용액에 담급니다. 잠시 동안 몸을 담그면 금 나노 입자 mAB 흡수를 합니다.
인큐베이터의 넓은 멤브레인을 37도 건조시킵니다. NC 멤브레인 아래에 전처리된 컨쥬게이트 패드를 붙여넣은 경우 NC 멤브레인과 겹치는 길이는 0.1cm여야 한다. Fusion3 멤브레인을 길이 1.8cm, 너비 3.5cm로 다듬고 샘플 패드로 사용합니다.
그런 다음 샘플 패드를 PVC 보드에 놓고 컨쥬게이트 패드와 2밀리미터 겹칩니다. 절단, 절단 기를 사용하여 3.5 밀리미터 폭 스트립에 종이 보드를 조립하고 배치 라미네이션 시스템을 사용하여 컴팩트. 마지막으로 테스트 스트립을 셸에 넣습니다.
건조제와 상점에서 빛이 없는 알루미늄 호일 백에 밀봉하십시오. 이제 ICS가 조립됩니다. 샘플 용액 50마이크로리터를 샘플 구멍에 떨어뜨려 크로마토그래피 공정을 관찰합니다.
다음으로 휴대용 스트립 판독기를 사용하여 스트립을 분석합니다. 이 기계는 제어 선에 대한 테스트 라인의 비율을 제공할 수 있습니다. ICS 테스트의 특이성, 감도, 반복성 및 안정성을 평가합니다.
준비된 콜로이드 골드 솔루션을 읽었습니다. 전염 전자 현미경 분석은 입자가 모양의 다각형이고 14 나노미터 평균 직경으로 균일하게 분포되었다는 것을 밝혔습니다. 고해상도 전송 전자 현미경 이미지는 금 나노 입자의 0.117 나노 미터의 간격으로 연속 프린지 패턴을 보였다.
자외선 가시 흡수는 구연산 나트륨과 클로로우릭산의 비율을 변경하여 콜로이드 금 입자의 다양한 크기를 얻을 수 있음을 나타냈다. 정량 실험에서 사이코사포닌 D의 테스트 결과를 가진 스트립은 휴대용 ICS 판독기를 사용하여 스캔하였다. 사이코사포닌 D의 비농도를 각 농도에서 상응하는 흡수에 관련시킴으로써 표준 곡선을 계산했습니다.
방법론적 조사 후, 소분자 화합물의 정량적 및 반질적 검출을 위해 방법을 적용할 수 있다. 이 절차는 콜로이드 금의 준비, 금 나노 입자 mAB 공수의 합성, 스트립 및 방법론 적 조사를 조립 포함. 이 작품은 작은 분자의 신속하고 정량적 검출에 사용하기 위한 면역 크로마토그래피 스트립의 개발을 위한 상세한 프로토콜을 제공합니다.
이 비디오를 본 후 면역 크로마토그래피 스트립의 준비에 대한 좋은 이해가 있기를 바랍니다. 당신의 실험에 대한 보고 행운을 주셔서 감사합니다.
