手順は、コロイド金の調製および免疫クロマトグラフィーストリップの組み立てについて説明する。まず、クロロアウリン酸とクエン酸ナトリウムを金コロイドの合成に用いた。クエン酸ナトリウムをクロロウ酸溶液に添加し、沸騰させ、適切な粒径で金コロイドを得た。
合成は、コロイド状の金抗体共役体である。遠心分離後、金コロイド粒子を適当な溶液に溶解し、次いで再懸濁して金溶液コロイドを得た。ガラス繊維膜を共役に沈め、コンジュゲートパッドを準備します。
TラインとC線としてNC膜上に人工抗原と二次抗体をドロップします。NC膜、吸収性膜、サンプルパッド、ガラス繊維膜をそれぞれPVCボードに取り付けます。組み立てた紙板を幅3.5ミリメートルに切ります。
完全な%の塩化物酸溶液と1%クエン酸ナトリウム溶液をそれぞれコンフェクトする。磁気スターラーをオンにし、ミキサーにフラスコを置きます。丸底フラスコに120ミリリットルの蒸留水を加え、サーモスタット磁気攪拌機で沸騰させます。
沸騰させ、0.5ミリリットルのフルパーセントクロロアウリン酸と5ミリリットルのクエン酸ナトリウムを素早く加えます。5~10分加熱を続けます。溶液の色が淡黄色からワインレッドに変わるのを観察します。
恒温磁気ミキサーの電源をオフにし、室温まで冷却し、混合物をきれいなボトルに入れます。4センジグレードで保管してください。金ナノ粒子は、Tyndall効果を示しています。
金ナノ粒子の大きさと形態は、紫外線分光法と透過型電子顕微鏡イメージングによって決定した。8本のチューブに100マイクロリットルの塩化ナトリウム溶液を加えます。コロイドゴールド溶液をpH 5~12に調整し、1リットル当たり0.1モルの炭酸カリウムを使用します。
塩化ナトリウムを含む8本のチューブにコロイドゴールド溶液100マイクロリットルを加えます。ブレンド後数分ポストを立てます。各チューブ溶液の色の変化を観察し、赤いままのチューブを記録します。
コンジュゲートを調製するための最適なpH値として、最低量の炭酸カリウムと安定した溶液色のpH値を選択してください。同じアプローチを適応させました。色の変化を観察し、赤いままのチューブを記録します。
mABの濃度が最も低く、溶液色が最適なmAB量として抗体量を選択してください。10ミリリットルコロイドゴールド溶液を取り、最適なpH値に溶液を調整するために、1リットルの炭酸カリウムあたり0.1モルを使用してください。適度な濃度でSSd mabをゆっくりと加え、室温で30分間振ります。
2000 RPMで20分間、4センジグレードで20分間遠心分離する。析出した金の不純物を含む沈殿物を除去する。混合物を10,000RPMで40分間遠心分離する。
上清を捨てます。沈殿物はコロイド状金mAB共役体である。トリス塩酸、BSA、Tween 20、およびPEG 20,000を加え、次いで、再懸濁液を調製するためによくブレンドする。
再懸濁液バッファーを追加し、沈殿物を解化します。膜材ストリップとしては、ガラスセルロース膜、ポリエステルセルロース膜、PVC基板等が挙げられる。膜材料は、不不均一性を取り除くために滅菌顕微鏡によって追跡および評価する必要がある。
まず、PVCボードの2センチメートルにNC膜を配置し、ボードのセクションの端から2センチメートル。第二に、テストラインとして上端から2センチメートルでNC膜に1ミリリットルSSd-BSAあたり2ミリグラムを落とし、コントロールラインとして下端から2センチメートルでNC膜に1ミリリットル当たり1.5ミリグラムを落とします。NC膜上のPVCシートに吸収パッドを取り付け、NC膜と2ミリメートル重なります。
ガラス繊維膜を長さ5センチメートル、幅2センチメートルにトリミングし、コンジュゲートパッドとして使用します。ガラス繊維膜を金ナノ粒子mABコンジュゲート溶液に沈めます。金ナノ粒子mAB吸収を作るためにしばらく浸してください。
インキュベーターの広い膜を37度乾かします。前処理コンジュゲートパッドをNC膜の下に貼り付け、NC膜と重なり合う長さは0.1センチメートルでなければなりません。Fusion3膜を長さ1.8センチメートル、幅3.5センチメートルにトリミングし、サンプルパッドとして使用します。
次に、サンプルパッドをPVCボードに置き、コンジュゲートパッドと2ミリメートル重ね合たします。切断、切断機を使用して3.5ミリメートル幅のストリップに紙ボードを組み立て、バッチラミネーションシステムを使用してコンパクト。最後に、テストストリップをシェルに配置します。
乾燥剤を含むアルミホイル袋に封じ、光から離れて保管してください。ICS が組み立てられました。50マイクロリットルのサンプル溶液をサンプルホールに落とし、クロマトグラフィープロセスを観察します。
次に、ポータブルストリップリーダーを使用してストリップを分析します。機械は制御線に対するテストラインの比率を提供できる。ICSテストの特異性、感度、再現性、安定性を評価します。
準備されたコロイドゴールド溶液を読み取った。透過型電子顕微鏡の分析により、粒子は形状が多面的で、平均直径14ナノメートルで均一に分布していたことが明らかになった。高解像度の透過型電子顕微鏡画像は、金ナノ粒子の0.117ナノメートルの間隔を持つ連続的なフリンジパターンを示した。
紫外線可視吸収は、クエン酸ナトリウムとクロロアウリン酸の割合を変化させることによって、金粒子の異なるサイズが得られることを示した。定量実験では、サイコサポニンDの試験結果を有するストリップを、ポータブルICSリーダーを用いてスキャンした。我々は、各濃度で対応する吸収に対する、非濃度のsaikosaponin Dを関連付けることによって標準曲線を算出した。
方法論的調査の後、この方法は、低分子化合物の定量的および半定性的な検出に適用することができる。この手順には、金コロイドの調製、金ナノ粒子mABコンジュゲートの合成、ストリップの組み立て、および方法論的調査が含まれる。この研究は、低分子の迅速かつ定量的な検出に使用するための免疫クロマトグラフィーストリップの開発のための詳細なプロトコルを提供する。
このビデオを見た後、私はあなたが免疫クロマトグラフィーストリップの準備のための良い理解を持っていることを願っています。あなたの実験のために見て、幸運をありがとう。
