用于果蝇消费量化的高吞吐量微板馈线分析

微板进料检测提供了一种简单、高通量、经济的方法来测量果蝇喂养行为，并且与其他更精细的方法相比具有多重优势。通过用板读器测量吸水性来量化消耗，可消除手动测量并避免手动数据输入。数据也可进行程序提取和处理。

通过这种高通量检测，我们可以量化水溶性营养素、药物、药物或毒素的消耗，系统可以修改以应用于各种昆虫物种。首先，将熔融的藻醇倒入试剂槽中，然后使用多通道移液器将 80 微升熔融藻醇排入 96 井微板的每口井中。将剩余的糖在密封的袋子中冷藏长达一周，并重新熔炼以制作额外的盘子。

如果屏障条太松，将它们绕在手指周围，使其曲率，使其保持在通道中。将屏障条插入障碍条通道，为耦合器做好准备。将耦合器贴在饥饿板上，确保不要使用耦合器操纵板，因为耦合器可能会滑落。

确保耦合器的角角与微板的角度角匹配，以保持正确的方向。在二氧化碳麻醉下，排序三到五天大的苍蝇。将单个苍蝇逐列装载到饥饿板中。

通过将障碍条调整到封闭位置，在填充时关闭每个列。仔细记录微板内的示例布局。一旦饥饿板被填满，让苍蝇在去除二氧化碳后自发恢复，并饿死它们六个小时，从他们最初的麻醉时间开始。

在15毫升圆锥管中溶解0.4克蔗糖和0.1克酵母提取物，在10毫升蒸馏水中准备10毫升液体食品。旋涡管，直到固体完全溶解。加入40微升染料库存溶液，将液体食品转移到10毫升注射器中，用0.45微米过滤器倾斜。

一次过滤约 1.5 毫升的溶液到 1.7 毫升微中心管中。将包含溶液的注射器放在一边，并在进料板制备过程中根据需要过滤其他溶液。用密封膜密封 1536 井微板的底部，准备支线板。

使用密封桨彻底粘附在薄膜上。然后，用剃须刀刀片修剪左右边缘的多余薄膜。将过滤后液体食品柱的10微升分配到左上部油井中，每组4口井的1536孔微板。

一旦所有的油井都填满，按照密封微板底部的相同步骤，在板的顶部涂上密封膜。重复上述步骤，以获得所需的车牌数。将板以 200 倍 G 离心 10 秒以沉积流体。

不要让板被冷却，因为这会导致凝结积聚在井中，遮挡吸收读数。用装有直径为0.25毫米的针头的针头探针工具穿孔板顶表面的井，使用与分配溶液时相同的顺序穿孔。擦去溶液之间的针头，以防止交叉污染。

翻转盘子，打孔底部的井。在没有盖子的情况下，在 630 纳米下读取板的吸气度。在顶部密封膜上放置一个内部盖子，以确保冷凝环包围穿孔井，然后将外部盖子放在板上。

将喂食板朝上放在耦合器上，以便导引对馈盘和饥饿板的适当孔对齐。确保耦合器和板正确定位。一旦所有的进料板都装到耦合器上，通过调整耦合器上的屏障条来打开板的井。

将耦合器和板组件放在辅助容器中。将装有浸泡纸巾的移液器盒的下半部分放入每个次要容器中，以提供湿度。关闭辅助容器的盖子并将其转移到受控环境中。

允许苍蝇消耗22小时。曝光22小时后，检查每个板是否有死苍蝇，并相应地更新板布局。检查完所有盘子后，通过将二氧化碳泵入次要容器内，对苍蝇进行集体麻醉。

大约60秒后，确保所有的苍蝇都固定。轻轻地将苍蝇敲入饥饿板，更换塑料屏障条。取出进料板以进行读取。

在 630 纳米重读板的吸气度。重复此过程，直到所有板都读取完毕。蒸发量被量化为每口井，并被发现以确定是否存在任何相关性，在个别板井。

计算蒸发与行和蒸发与柱的 Pearson 相关系数，以评估蒸发和井位置之间的趋势。对三到五天大的广深蝇的消费量进行了量化，以确定协议的有效性。苍蝇可以选择4%蔗糖溶液与1%酵母提取物和4%蔗糖溶液，辅以15%乙醇和1%酵母提取物。

男性和女性都表现出对乙醇和酵母提取物溶液的压倒性偏好。在构建支线板时，必须保持一致性，确保每只苍蝇在食物体积、蒸发和获取方面具有相同的消耗情景。与传统方法相比，这项技术将使 Drosophila 领域的研究人员能够对产量更高、成本更低的消费和偏好行为进行高通量检测。