秀丽隐杆线虫 作为发现生物活性化合物对抗聚谷氨酰胺介导的神经毒性的模型系统

作为神经退行性和行为研究中强大的动物模型，秀丽隐杆线虫可用于使用亨廷顿舞蹈症样模型有效地筛选和评估有毒化合物对聚谷氨酰胺神经毒性的侵害。该技术的主要优点是分析和整合不同秀丽隐杆线虫模型中的多种表型。实际上也像秀丽隐杆线虫模型用于这种方法。

它确实为筛查和研究其他神经退行性延迟和其他延迟的治疗候选者提供了规模。请注意秀丽隐杆线虫生长中使用的温度，并在发育的正确阶段进行测试。演示该程序的将是三名研究生姜一一、岳夏和王强强。

首先将 300 至 500 个同步的 AM141 线虫 L1 幼虫转移到 48 孔板的每个孔中，其中含有 500 微升含有 OP50 大肠杆菌菌株和每毫升黄芪 5 毫克的 S 培养基。用封口膜密封板，并在 20 摄氏度和每分钟 120 旋转下孵育所需的时间间隔。将线虫转移到无菌的1.5毫升微量离心管中，并通过离心用M9缓冲液洗涤三次以除去剩余的OP50细胞。

然后，将AM141线虫重悬于M9缓冲液中。现在，将10至15个线虫转移到384孔板中的每个孔中，为每个处理设置10个重复孔，并向每个孔中添加10微升200毫摩尔叠氮化钠，通过让线虫沉降到底部来麻痹线虫。将板置于高内涵成像系统中以获取荧光图像。

打开图像采集软件，设置文稿中提到的参数。通过打开检查板数据窗口并选择用于图像分析的测试板来分析图像数据。双击测试孔以显示其图像。

然后选择计数细胞核作为分析方法，然后单击配置设置按钮。定义来自FITC通道的源图像并选择标准算法。按照文本稿件中的描述设置图像分析参数并对其进行测试以优化分析方法。

保存设置并在所有孔上运行分析。将总核导出为每孔中Q40:YFP聚集体的总数。计算每个孔中的线虫数量，并计算每组中每个线虫的平均Q40:YFP聚集体数。

然后，计算抑制指数。为了制备用于polyQ神经毒性测定的线虫，将300至500个HA759线虫的同步L1幼虫转移到48孔板的每个孔中，其中含有500微升含有OP50大肠杆菌菌株和每毫升黄芪5毫克的S培养基。密封板后，如前所述，将线虫孵育、收获并重悬于 M9 缓冲液中。

现在，通过将两克琼脂糖加入100毫升M9缓冲液中，在琼脂糖垫中制备，并在微波炉中将溶液加热至接近沸腾。将0.5毫升融化的琼脂糖分配到放置在两块两毫米厚的玻璃板之间的一毫米厚的显微镜载玻片的中心，垂直覆盖另一张载玻片。琼脂糖冷却并凝固后，轻轻取下顶部载玻片。

通过在农业垫上加入一滴 20 毫摩尔叠氮化钠，然后将 15 至 20 个 HA759 线虫转移到滴剂中以固定它们来开始 ASH 神经元存活测定。将盖玻片轻轻地放在线虫上。现在，将载玻片放在装有数码相机的荧光显微镜下。

选择40倍物镜和FITC滤光片来检测线虫头部区域的GFP阳性ASH神经元。随机选择每组50个以上的线虫，计算其头部区域有GFP标记的双侧ASH神经元的线虫数量，然后计算ASH神经元的存活率。对于渗透避免测定，通过在中间创建八摩尔甘油线，将无食物 NGM 板分为正常区和捕获区。

然后，在距离甘油线约一厘米的地方散布200毫摩尔叠氮化钠线，以麻痹穿过甘油屏障进入陷阱区的线虫。将大约 200 个线虫转移到每组三个复制板的正常区域。然后，在陷阱区加入一滴1%丁二酮以吸引线虫。

立即盖上培养皿的盖子，并在23摄氏度下孵育90分钟。在显微镜下对两个区域的线虫数量进行评分并计算回避指数。转基因polyQ菌株AM141在其体壁肌肉细胞中强烈表达Q40:YFP融合蛋白，通过该自动成像和分析方案鉴定，其增加的量被黄芪处理抑制，证明其保护潜力。

线虫头部区域GFP荧光和双侧ASH神经元缺失表明ASH神经元死亡。该ASH神经元存活测定可用于目视评估测试化合物对优雅Caenorhabditis神经元的神经保护作用。化学感觉回避测定用于检查由polyQ聚集介导的ASH神经元功能丧失的有效测试样品。

用黄芪在15摄氏度下处理3天的HA759线虫回避指数提高到0.6以上，显示出多糖对行为障碍的神经保护作用。为了评估测试化合物的整体神经保护能力，整合了来自各个测定的数据，并以雷达图的形式呈现，显示黄芪治疗组中三角形的面积大于对照组的面积，表明多糖的抗polyQ作用。请记住，食物、温度和湿度可能会影响秀丽隐杆线虫的行为。