角膜上皮机械和化学损伤的离体和体内动物模型

建立了体外和体内动物模型，用于研究机械和化学角膜损伤。该技术为研究人员提供了一个易于建立的平台来研究角膜的机械和化学损伤。为了创建小鼠角膜上皮伤口，使用皮肤活检打孔器标记麻醉小鼠的中央角膜，以确认伤口的边界清晰且可测量的区域。

轻轻地将冲头压在中央角膜上以留下圆形标记 使用带有 0.5 毫米毛刺的手持式角膜防锈环去除器将角膜上皮清创到 Bowman 层，确保不会损坏 Bowman 层。用角膜钳去除伤口边缘残留的松散组织。用荧光染色确认清创区域，将一滴生理盐水滴在荧光素纸上溶解荧光素，然后将含荧光素的滴剂滴在小鼠上皮缺损上以在钴蓝光下观察。

通过轻轻按压安乐死小鼠的上眶和下眶边缘将眼球推出，继续进行小鼠角膜擦伤伤口模型的离体培养。将闭合的角膜剪刀的尖端沿下眶壁引入球后间隙，确保不穿透眼球。用0.3毫米角膜钳固定眼球，然后用角膜剪刀切开视神经和眶周软组织，隔离眼球。

对于小鼠眼球的离体培养，在孔内准备一个48孔板，其中有熔化的蜡并等待凝固，然后用结膜镊子的尖端，在固化蜡的表面上创建一个圆孔以容纳眼球。将收获的眼球直接放在带有蜡覆盖的底部和侧壁的 48 孔板上以建立稳定性。根据研究目的，用含有 1% 胎牛血清的 DMEM 培养眼球，联合或不联合抗生素。

用培养基浸入眼表，不要使眼球漂浮，并通过荧光素染色和在钴蓝光下用数码相机收集照片来记录伤口愈合的过程。为了诱导碱性烧伤，请将直径为8毫米的圆形滤纸放入培养皿中。使用滴管，将0.5普通氢氧化钠加入培养皿中以浸泡滤纸并从滤纸中排出多余的溶液，然后将它们放入麻醉的兔角膜上。

用眼睑窥器打开眼睑后，确保兔膜不干扰滤纸的插入，并将碱浸泡的滤纸放在中央角膜上30秒。取出滤纸，用10毫升生理盐水冲洗眼表，洗掉碱性物质。为了完成角膜缺损，使用角膜锈环去除剂将混浊区域内的角膜上皮清创到 Bowman 膜。

在钴蓝光下用荧光素染色确认清创区域，并使用角膜钳去除残留的角膜上皮。为了通过跗骨固定伤口状况，请确认鼻膜平滑地覆盖眼表和鼻侧角膜上皮缺损。使用6-0缝合线进行有或没有局部药物的临时跗骨检查 为了保护眼表并防止兔子抓伤它，确保睑裂缝合线距离上下睑边缘3至4毫米，有4到5个系带和更长的结，以防止兔子打破缝合线。

在小鼠角膜上皮的离体伤口愈合模型中，在小鼠角膜上皮体内清创后2毫米处观察到荧光素染色阳性的中央角膜区域轻度凹陷。固定在蜡包衣48孔培养板上的小鼠眼球的离体培养每天在体视显微镜下的48孔培养板内检查和记录。在清创小鼠角膜上皮一天后，在钴蓝光下获得的数码照片中发现了一个直径为2毫米的圆形荧光素染色的上皮缺损。

在对兔角膜上皮造成碱损伤后，观察到中央角膜上有或没有钴蓝光的荧光素染色阳性，边缘清晰而完整的圆形边缘。从角膜缘观察到角膜上皮伤口再上皮化伴pannus向内生长。最重要的步骤是在小鼠和兔角膜表面上产生光滑甚至上皮缺陷的程序。

新的医疗和外科疗法可以在这些平台上进行测试。手术后可以监测再上皮化的效果。该方案中的角膜新生血管形成和损伤后混浊将是进一步研究的未满足需求。