מודלים של בעלי חיים Ex vivo ו-in vivo הוקמו לחקר פגיעות מכניות וכימיות בקרנית. הטכניקה מספקת פלטפורמה קלה לבנייה עבור חוקרים לחקור פגיעה מכנית וכימית של הקרנית. כדי ליצור פצע אפיתל של הקרנית מורין, סמן את הקרנית המרכזית של העכבר המורדם באמצעות ניקוב ביופסיה של העור כדי לאשר אזור מוגבל היטב ומדיד היטב של הפצע.
הכנס בעדינות את האגרוף מעל הקרנית המרכזית כדי להשאיר סימן מעגלי הפחת את אפיתל הקרנית עד לשכבת באומן באמצעות מסיר טבעת חלודה קרנית ידני עם בור 0.5 מילימטר המבטיח שלא לפגוע בשכבת באומן. הסר את שאריות הרקמות הרופפות בשולי הפצע בעזרת מלקחיים בקרנית. אשר את אזור ההטריה עם כתמים פלואורסצנטיים על ידי הנחת טיפה של מי מלח רגילים על נייר פלואורסצאין כדי להמיס פלואורסצאין ולאחר מכן הנחת הטיפה המכילה פלואורסצאין על פגם אפיתל מורין כדי לדמיין אותו תחת אור כחול קובלט.
המשך עם תרבית ex vivo של מודל פצע שחיקת הקרנית על ידי לחיצה עדינה על שולי המסלול העליונים והנחותים של עכברים מורדמים כדי לדחוף את גלגל העין החוצה. הכניסו את קצה מספריים הקרנית הסגורים לחלל הרטרובולברי לאורך דופן המסלול התחתון כדי להבטיח שלא יחדרו את גלגל העין. החזק את גלגל העין יציב עם מלקחיים קרנית 0.3 מ"מ ולאחר מכן לחתוך את עצב הראייה ואת הרקמה הרכה periorbital עם מספריים הקרנית כדי לבודד את גלגל העין.
לתרבית אקס ויו של גלגלי עיניים מורין, הכינו צלחת בת 48 בארות עם שעווה מומסת בתוך הבאר והמתינו להתמצקות, ואז בעזרת קצה מלקחיים של לחמית, צרו חור עגול על פני השטח של שעווה מוצקה כדי להתאים לגלגלי העיניים. הניחו את גלגלי העיניים שנקטפו ישירות על צלחת 48 בארות עם תחתיות ודפנות מכוסות שעווה כדי לבסס ייצוב. תרבית את גלגלי העיניים עם DMEM המכיל 1% נסיוב בקר עוברי עם או בלי אנטיביוטיקה בהתאם למטרת המחקר.
לטבול את משטח העין עם מדיום התרבית מבלי לגרום לגלגל העין לצוף ולתעד את מהלך ריפוי הפצע על ידי צביעת פלואורסצאין ואיסוף תמונות במצלמה דיגיטלית תחת אור כחול קובלט. כדי לגרום לפציעת כוויה בסיסית, הניחו נייר סינון עגול בקוטר של 8 מ"מ בצלחת פטרי. בעזרת טפטפת, מוסיפים 0.5 נתרן הידרוקסידי רגיל לצלחת הפטרי כדי להשרות את ניירות הסינון ולרוקן את התמיסה העודפת מנייר הסינון לפני הנחתם על קרנית הארנב המורדמת.
לאחר פתיחת העפעפיים עם ספקולום עפעפיים, יש לוודא כי קרום הארנב אינו מפריע להחדרת נייר הסינון והניחו את נייר הסינון הספוג אלקליות על הקרנית המרכזית למשך 30 שניות. הסר את נייר הסינון ושטוף את משטח העין עם 10 מיליליטר של מלוחים רגילים כדי לשטוף את החומר אלקלי. כדי להשלים את הפגם בקרנית, יש לכרות את אפיתל הקרנית בתוך האזור האופוס עד לקרום באומן באמצעות מסיר טבעות חלודה בקרנית.
יש לאשר את אזור ההטריה עם כתמים פלואורסצאין מתחת לאור הכחול קובלט ולהסיר שאריות אפיתל הקרנית באמצעות מלקחיים בקרנית. כדי להבטיח את מצב הפצע עם tarsorrhaphy, לאשר כי קרום nictitating מכסה בצורה חלקה את פני השטח של העין ואת הפגם אפיתל הקרנית בצד האף. בצע tarsorrhaphy זמני עם או בלי חומרים מקומיים באמצעות תפר 6-0 כדי להגן על פני השטח של העין ולמנוע מהארנב לשרוט אותו, ודא כי התפר עבור tarsorrhaphy הוא 3 עד 4 מ"מ מן השוליים העליון והתחתון עם ארבעה עד חמישה קשרים וקשרים ארוכים יותר כדי למנוע את הארנב לשבור את התפרים.
במודל ריפוי הפצעים ex vivo של אפיתל הקרנית של העכבר, אזור הקרנית המרכזי בדיכאון קל עם כתם פלואורסצאין חיובי נצפה בשני המילימטרים המרכזיים לאחר הטריה in vivo של אפיתל הקרנית של העכבר. תרבית האקס ויו של גלגלי העיניים המורין המקובעים על צלחת תרבית 48 בארות מצופה שעווה נבדקה ותועדה מדי יום בתוך צלחת תרבית של 48 בארות תחת מיקרוסקופ סטריאו. יום לאחר הריסת אפיתל הקרנית המורין, התגלה פגם אפיתל עגול אחד מוכתם פלואורסצאין בקוטר 2 מילימטרים בתצלומים דיגיטליים שהתקבלו תחת אור כחול קובלט.
לאחר יצירת פגיעה אלקלית באפיתל הקרנית של הארנבת, נצפתה צביעה פלואורסצאין חיובית עם או בלי אור כחול קובלט מעל הקרנית המרכזית עם שוליים עגולים ברורים ומלאים. פצע אפיתל הקרנית re-epithelialization עם pannus ingrowth נצפתה מן הלימבוס. השלבים החשובים ביותר הם הליכים ליצירת פגמים חלקים ואפילו אפיתליאליים על משטחי הקרנית של העכבר והארנב.
ניתן לבדוק טיפולים רפואיים וכירורגיים חדשים בפלטפורמות אלה. ההשפעה של אפיתל מחדש ניתן לפקח לאחר הליכים. ניאו-וסקולריזציה ואטימות של הקרנית לאחר פציעה בפרוטוקול זה יהיו צורך בלתי מסופק במחקר נוסף.
