该协议允许通过柔性电子设备传递脉冲电场，以研究它们对胶质母细胞瘤的治疗效果。我们通过成像可视化体内肿瘤微环境来做到这一点。生物电子学正在使用几种日益复杂的不同模型集成到该协议中，以研究脉动场对癌症的影响。
这项工作中提出的微细加工技术也可以作为治疗其他类型的癌症的手段进行测试，包括患者来源的异种移植物。这朝着为每个患者量身定制精准医疗的想法发展。这些探头采用标准的微细加工技术制成，因此制造非常简单，任何拥有洁净室的人都可以制造它们。
对于金电极图案，通过将干净的载玻片放入沉积室中，将三微米的聚对二甲苯沉积系统沉积在聚对二甲苯沉积系统中。在铝舟中称取六克聚对二甲苯C，将其放入炉中，抽空机器，然后用手稿中描述的参数开始沉积。当沉积完成并且汽化器温度低于40摄氏度时，关闭冷却器，汽化器，炉子。
放空机器并收集样品。用负光刻胶以1， 000倍G旋转涂覆等离子体处理过的样品40秒。通过具有叉指电极设计的掩模曝光光刻胶。
然后将样品浸入无金属离子显影剂中三分钟，以去除未曝光的光刻胶。要用热蒸发器沉积20纳米的铬粘附层和300纳米的金层，请排气蒸发器机器并用金属螺钉将样品夹在上圆板上。分别用铬和金填充专用坩埚。
密封并抽真空机器，并开始旋转样品架。选择含铬的坩埚，慢慢增加电流，直到沉积速率达到每秒0.2埃。打开快门，等到20纳米铬沉积，关闭快门，慢慢降低电流，直到零毫安。
选择含金坩埚并缓慢增加电流，直到沉积速率达到每秒0.2埃。打开百叶窗蒸发金，等到沉积10纳米的金，然后将沉积速率增加到每秒1.5埃，直到沉积约300纳米。关闭快门，将电流缓慢降低至零毫安。
将样品浸入含有丙酮的烧杯中。然后用异丙醇冲洗样品并用气枪干燥。在四层PEDOT:PSS溶液上以150倍G旋转35秒。
通过将样品浸入水中来去除牺牲的Parylene C层。将样品浸入去离子水中30分钟，以去除PEDOT:PSS薄膜中剩余的肥皂和低分子量化合物，并将样品从玻璃基板上分离。在96孔板的每个孔中小心地加入75微升熔融的1%琼脂糖溶液，并在室温下凝固15分钟。
分离在稳定细胞系生成期间获得的转导胶质母细胞瘤细胞。每孔加入 10， 000 个胶质母细胞瘤细胞，并使用含有每升 1 克葡萄糖、L-谷氨酰胺、丙酮酸钠和碳酸氢钠、10% 胎牛血清、每微升青霉素 100 单位和每微升链霉素 100 微克的 DMEM 将总体积补足至每孔 150 微升。每两天用新鲜培养基更换一半的培养基，直到进一步实验，同时将移液器尖端保持在孔的上部，以避免损坏琼脂糖或球体本身。
将日本鹌鹑的受精卵，将日本鹌鹑的受精卵放在带有自动旋转器的托盘上的孵化器中，该托盘每两小时翻转一次鸡蛋。这一天被认为是胚胎的零日。在胚胎第三天，使用镊子轻轻打开鸡蛋，镊子的细尖端用70%乙醇预先清洗。
将胚胎倒入塑料称量舟中，用另一张称量船盖住，并将其置于37摄氏度的标准加湿培养箱中三天。在胚胎第六天，用 23 号针在脉络膜尿囊膜上做一个小切口。使用移液管将七天的球体放在切口上，并将胚胎放回培养箱三天，直到进一步实验。
放置一滴DPBS以覆盖开颅术。将柔性电极放在DPBS的液滴上，然后将带有接触垫的探头背面轻轻放在鼠标的背面。用一小张纸吸收DPBS液滴，直到探针可以平放在硬脑膜上并跟随大脑的曲率，确保小层盐水保持在电极下方，作为防止胶水溢出的屏障。
将一小滴硅胶粘合剂滴在探头上，并用五毫米的圆形盖玻片覆盖。向下推盖玻片，直到硅胶均匀分布，盖玻片与探头之间的距离最小。然后等待 30 秒，让硅胶凝固。
要固定盖玻片，请快速在其侧面涂上强力胶并将其向下推，直到胶水变实。使用牙签在探头的颈部涂抹强力胶，注意将强力胶拉到颈部下方以提供稳定的支撑。用牙科水泥覆盖颅骨以形成慢性帽，并特别注意仅覆盖盖玻片的边缘。
抬起探头的背面，在探头颈部下方涂上水泥。在水泥固化之前，将探针的其余部分放在水泥上。在实验过程中，轻轻地向下推探头的颈部，使其表面与盖玻片处于同一水平，而不是妨碍显微镜物镜。
用不超过1.5毫米的牙科水泥层覆盖探头颈部的顶部，以牢固地固定探头。在盖玻片周围一到两毫米处建造一个水泥井，呈现一个1.5毫米的脊，为两个光子成像的浸没液创建一个盆地。水泥固化后，进行术后镇痛，并通过用纸巾包裹动物并将其靠近红外灯泡来保持动物温暖直至恢复。
PEDOT:PSS涂层电极显示出典型的电容和电阻主导区域，由截止频率隔开，而未涂层电极仅显示电容行为。用明场显微镜观察的球状体的生长表明，根据细胞系和接种的细胞数量，至少需要两到三天才能获得球形和致密球状体。在卵模型中，绒毛膜尿囊膜中的球状体移植可以通过荧光显微镜进行评估，因为活细胞具有细胞内钙，并且可以通过将荧光染料注射到血管中来评估肿瘤的血管化。
与盐溶液中的阻抗相比，由于生物环境的存在，预计体内阻抗在频率高于100赫兹时会增加。血管化神经实质和肿瘤浸润可以通过两个光子显微镜在数周内通过透明底物观察和表征。使用在感兴趣的细胞中表达荧光蛋白的转基因动物可以证明仅通过电极植入诱导的最小炎症过程。
它可以显示小胶质细胞和单核细胞在植入脉冲电场刺激电极26天后的存在。在肿瘤周围和内部都发现了外周单核细胞衍生和脑共振小胶质细胞。植入手术成功的关键点是确保颅窗的密封和平整度，并优化与探头接触的质量。
除了活体成像之外，还可以考虑将我们的方案与其他措施和技术相结合，例如细胞因子的血液工作采样和测量，流式细胞术的免疫状态，甚至行为分析。这项工作为使用柔性植入式设备治疗癌症铺平了道路，并为生物电子医学用于这种慢性疾病开辟了新的前景。
